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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): good 2011-05-13 13:40:25
1：首先做一个温度梯度（退火温度）看看哪一个温度下P出来的条带最亮，TM1+TM2/2=66.12,可以设置如下梯度：60 62 64 66 68 ；

2：延伸1:30,25个循环就可以，因为你只是看一下哪一个温度下最亮，所以循环数25个循环足矣。

貌似我都给你做了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-13 12:21:32
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智能机器人

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gagalady

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【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 可行 2011-05-13 15:40:51
cycle1:94° 3min
cycle2：94° 30sec  60° 30sec 72° 70sec   30个循环
cycle3：72° 10min
cycle4: 4° ∞
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3楼2011-05-13 12:37:52
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天使托

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T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-16 09:01:05
引用回帖:
Originally posted by catmihzh at 2011-05-15 21:05:39:
引物应该没什么问题，具体操作就是常规地加完体系去PCR啊，我的体系是：
10×PCR Buffer 2μl
dNTP Mixture 0.5
引物1 0.5
引物2 0.5
基因组DNA模板 3.0
Taq plus Polymerase 0.5
ddH2O 18
你看看有没 ...

你这样做试试

50ul体系：
10×PCR Buffer 5μl
dNTP Mixture   1ul
引物1 1ul
引物2 1ul
基因组DNA模板 1ul（可以用genome和裂解的菌体）
Taq plus Polymerase 1ul
ddH2O 补至50ul

分装5管，5个不同温度梯度试试。

你buffer加的太少，10倍的buffer啊。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
14楼2011-05-15 22:11:11
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