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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 直接法提取沉积物DNA怎样超过20kb
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xintutiao

金虫 (小有名气)

[交流] 求助 直接法提取沉积物DNA怎样超过20kb 已有8人参与

请教各位大侠，我们实验室只能用直接法提取沉积物中的DNA，因为超速离心机坏了，现在一直用酚氯仿异戊醇提的，始终都是20kb，请问 我要是想提大片段的DNA 该怎么办 谢谢啦~
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1楼 2011-05-12 16:57:36
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shuixian2009

木虫 (知名作家)

优秀版主
★
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我提的是细菌的。。。用的试剂盒
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告别绝望 告别风中的山谷 哭是一种幸福
2楼2011-05-12 17:01:19
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lly198784

木虫 (正式写手)
★
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要用基因提取试剂盒，但是这个步骤中也是要超速离心的啊。最好把离心机修好吧。
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3楼2011-05-12 17:29:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-12 19:01:47
20KB是不是就不能用了？如果用来构建文库，那还是可以的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-05-12 18:45:44
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5, EPI+1): 见你一次不容易，最近很忙？欢迎常来哦 2011-05-13 09:18:28
你跑电泳时用的估计是实验室很小的那种电泳槽，胶板，这样的胶分辨率根本不行。

如果要想分离大片段的，就得跑脉冲场电泳。其实你看到的20kb左右的里面包含大片

段的，当然也包含一些10几kb的，分不开的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2011-05-12 21:08:11
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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-05-12 21:08:11:
你跑电泳时用的估计是实验室很小的那种电泳槽，胶板，这样的胶分辨率根本不行。

如果要想分离大片段的，就得跑脉冲场电泳。其实你看到的20kb左右的里面包含大片

段的，当然也包含一些10几kb的，分不开的。

这确实是不错的建议。
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6楼2011-05-13 00:13:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5, EPI+1): 专业啊 2011-05-13 09:18:58
即使是六七厘米长的琼脂糖凝胶也是能分开40和20KB的，只要不是由于DNA样品太多造成堵车，N条带N合一成一坨。如果DNA太多，那就稀释，再在同一个泳道上两个M，一个是λ线性大约40多KB，另一个是λ/EcoR1（最大的一条带是21KB），M应该是能分离开的，要是不能分开，那我也不知道原因了。实在不行就做超过十厘米长的凝胶，我们喜欢用这个来纯化未培养微生物DNA。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-05-13 01:14:52
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5): good 2011-05-13 09:19:11
要看浓不浓
要是DNA量够多的话，给你支一损招，裂解完了，DNA沉淀那步（就是用到超速离心机的那步）直接用无菌牙签挑出来，放到另一管里，低速离离，干燥就能用了

如果你量少的话。。。。有点头痛了
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8楼2011-05-13 05:34:45
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): 有依据吗？欢迎交流哦 2011-05-13 09:19:41
要用脉冲电泳，胶的孔径达到极限了，一般的电泳只能分离20K一下
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9楼2011-05-13 09:05:54
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 鼓励 2011-05-13 15:45:42
http://en.wikipedia.org/wiki/Pulsed_field_gel_electrophoresis
如上所示
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10楼2011-05-13 10:12:07
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