| 查看: 2765 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
pigskin新虫 (初入文坛)
|
[求助]
定量PCR融解曲线问题
|
||
|
所有数据都进入平台期。 第一张图：Jurkat cell 原模板25ul体系。后面92度有个峰。而且很高的杂峰。 第二张图：Jurkat cell 模板稀释三倍。七十多度二聚体减少。后面92度还是有起峰。 第三张图：U936 cell 模板稀释三倍。后面92度没起峰。 第四张图：Jurkat cell 原模板GAPDH。 第五张图：Jurkat cell 普通PCR。 我是用SYBR green做的。在Jurkat cell中，起了杂峰，比主峰还高，以为引物特异性不好。可是，在U937 cell中，就没有出现这个杂峰。普通PCR也就一条带。定量后没有跑胶。现在我是重新设计引物还是应该怎么办？请各位指导下。万分感谢。      |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然面上和省基金B类撒花
已经有4人回复
-
华师大读博
已经有3人回复
-
急需审稿人！！！
已经有3人回复
-
申博/考博
已经有8人回复
-
一志愿A区211，22408 321求调剂
已经有8人回复
-
295分求调剂
已经有6人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有13人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有6人回复
-
期刊推荐
已经有5人回复
-
有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量扩增曲线与融解曲线分析
已经有9人回复
- RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
已经有12人回复
- 求高手解救荧光定量的问题
已经有6人回复
- 帮我看看这个溶解qPCR曲线
已经有6人回复
- 抽病毒DNA做荧光定量，阴性老是不成立，怎么办
已经有6人回复
- 荧光定量怎么成了这样
已经有26人回复
- 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
已经有9人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】内参照条带分子量大小与预期不符
已经有4人回复
- 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异
已经有6人回复
- 【求助/交流】求助关于实时定量PCR
已经有8人回复
- 【求助/交流】今天做的Rea Time PCR怎么看不到融解曲线？是不是前面设置出现了问题？
已经有8人回复
- 【求助/交流】PCR新手求助分析溶解曲线
已经有5人回复
- 【专题】real time pcr目的基因的融解曲线不明白
已经有8人回复
adslye
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 10
- 应助: 6 (幼儿园)
- 贵宾: 0.244
- 金币: 364.9
- 散金: 766
- 红花: 6
- 帖子: 514
- 在线: 119.5小时
- 虫号: 845336
- 注册: 2009-09-11
- 性别: GG
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
【答案】应助回帖
pigskin(金币+5): 谢谢。我也想还是换引物比较好。 2011-05-10 11:21:42
silicare(EPI+1): 2011-05-10 13:34:54
silicare(EPI+1): 2011-05-10 13:34:54
|
我做过点荧光，以下几点建议，欢迎拍砖： 1.定量出现杂峰后一定要跑胶看看。看下实际条带情况。 2.我觉得你引物特异性不好，不只有二聚体还有非特异性产物。 这种情况下我个人建议还是换引物。 3.NTC没做？不加模板的。在凝胶和荧光下都要做。这是必须的。 4.另外我想知道扩增曲线怎么样？正常吗？ 5.凝胶图不清晰，建议用高浓度的胶。我一般不称，就是琼脂糖多加点，这样分辨率会高些。 6.个人习惯问题，我建议引物不好时就不要用了。设计没那么难。 |
2楼2011-05-10 11:19:39
pigskin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3823.5
- 红花: 1
- 帖子: 46
- 在线: 12.1小时
- 虫号: 1205687
- 注册: 2011-02-18
- 性别: MM
- 专业: 神经生物学
3楼2011-05-10 11:22:30
pigskin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3823.5
- 红花: 1
- 帖子: 46
- 在线: 12.1小时
- 虫号: 1205687
- 注册: 2011-02-18
- 性别: MM
- 专业: 神经生物学
4楼2011-05-10 11:25:57
adslye
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 10
- 应助: 6 (幼儿园)
- 贵宾: 0.244
- 金币: 364.9
- 散金: 766
- 红花: 6
- 帖子: 514
- 在线: 119.5小时
- 虫号: 845336
- 注册: 2009-09-11
- 性别: GG
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
5楼2011-05-10 20:06:58
冷雁孤旅
木虫 (著名写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 3725.6
- 散金: 600
- 红花: 22
- 帖子: 1767
- 在线: 525.6小时
- 虫号: 1816501
- 注册: 2012-05-14
- 专业: 环境微生物学
6楼2014-05-28 17:14:36
5