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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot转膜
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烂铁

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western blot转膜

最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？
希望大家帮助，谢谢！！
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1楼 2011-05-09 10:51:13
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by linyingjia at 2011-05-09 21:42:52
我们是湿转   表示压力不大

请问一下，你们180KDa的蛋白用湿转条件是怎样的？多少伏或多少mA转多长时间？跪求
赞一下 回复此楼
17楼2013-05-23 19:05:59
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的膜活化了吗？
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2楼2011-05-09 11:57:24
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烂铁

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-05-09 11:57:24:
你的膜活化了吗？

恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 12:01:16
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:19:25
西瓜(金币+3): 热心噢 2011-05-09 17:55:41
引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-05-09 12:01:16:
恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的

那你有没有预染marker，你可以用一下，看看是否是转膜这步出了问题。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-05-09 12:29:58
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