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关于western blot转膜
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最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。 我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？ 希望大家帮助，谢谢！！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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3楼2011-05-09 12:01:16
2楼2011-05-09 11:57:24
4楼2011-05-09 12:29:58
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:14:51
西瓜(金币+5, EPI+1): 厉害的新虫噢！偶注意你很久了！ 2011-05-09 17:57:58
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:14:51
西瓜(金币+5, EPI+1): 厉害的新虫噢！偶注意你很久了！ 2011-05-09 17:57:58
| 做western blot，一般都是用预染Marker，转膜后如果膜上maker条带清晰的话，你要的蛋白样品一般都会转上的。用丽春红染不上色，很有可能是你样品蛋白含量比较少，条带不清晰，如果你的一抗效价比较高的话，同样能显出条带；还有一种可能就是你用的丽春红溶液用的次数过多，不好用了，如果是这种情况，建议新配一些丽春红染液试一下，不方便的话继续往下做就可以，看看最后结果再说。希望对楼主有所帮助！ |
5楼2011-05-09 13:02:50
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