应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot转膜
51/1返回列表
查看: 5538  |  回复: 20
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

烂铁

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western blot转膜

最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？
希望大家帮助，谢谢！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2011-05-09 10:51:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烂铁

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-05-09 11:57:24:
你的膜活化了吗？

恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 12:01:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的膜活化了吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-09 11:57:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:19:25
西瓜(金币+3): 热心噢 2011-05-09 17:55:41
引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-05-09 12:01:16:
恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的

那你有没有预染marker，你可以用一下，看看是否是转膜这步出了问题。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-05-09 12:29:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenhaiwang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:14:51
西瓜(金币+5, EPI+1): 厉害的新虫噢！偶注意你很久了！ 2011-05-09 17:57:58
做western blot，一般都是用预染Marker，转膜后如果膜上maker条带清晰的话，你要的蛋白样品一般都会转上的。用丽春红染不上色，很有可能是你样品蛋白含量比较少，条带不清晰，如果你的一抗效价比较高的话，同样能显出条带；还有一种可能就是你用的丽春红溶液用的次数过多，不好用了，如果是这种情况，建议新配一些丽春红染液试一下，不方便的话继续往下做就可以，看看最后结果再说。希望对楼主有所帮助！
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-05-09 13:02:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭