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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot
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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 关于western blot 已有2人参与

本人第一次做western blot，本实验室由于不是生物实验室，以前也没有师兄师姐做过，跑去生科院找师兄指导，师兄说到”用ECL显色试剂盒对转膜杂交好的PVDF膜进行显色就可以了“，我就以为直接用PVDF膜显色就可以去凝胶成像仪上拍照了，我们用的是bio-rad的凝胶成像仪，但是后来看网上的资料又说要转移到x-光片上才行，于是我就迷茫了，到底是直接拍照就可以了还是必须转移到X-光片上才能显影定影？求指导
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1楼 2015-08-31 11:51:38
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
x光片是感光材料，你的蛋白在PVDF膜上面，你的一抗二抗吸附上目标蛋白，二抗上面有HRP酶，ECL被HRP酶催化发光（而不是显色），由于那个光很微弱，所以要用X光片去显影，这是传统的western做法

至于成像仪这种比较新的，我也没做过，不太熟悉
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2楼2015-08-31 11:58:09
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxl1213: 金币+10, ★★★很有帮助, 有帮助哦 2015-09-07 15:04:04
传统的方法是PVDF膜+X光片曝光，需要暗室以及显影液、定影液，比较麻烦。现在有仪器，可以直接把杂交好的膜放在机器里，加入底物，直接可以曝光拍照的，比较方便~
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3楼2015-08-31 13:03:19
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