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lxl1213

新虫 (小有名气)

[求助] 关于western blot 已有2人参与

本人第一次做western blot,本实验室由于不是生物实验室,以前也没有师兄师姐做过,跑去生科院找师兄指导,师兄说到”用ECL显色试剂盒对转膜杂交好的PVDF膜进行显色就可以了“,我就以为直接用PVDF膜显色就可以去凝胶成像仪上拍照了,我们用的是bio-rad的凝胶成像仪,但是后来看网上的资料又说要转移到x-光片上才行,于是我就迷茫了,到底是直接拍照就可以了还是必须转移到X-光片上才能显影定影?求指导
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
x光片是感光材料,你的蛋白在PVDF膜上面,你的一抗二抗吸附上目标蛋白,二抗上面有HRP酶,ECL被HRP酶催化发光(而不是显色),由于那个光很微弱,所以要用X光片去显影,这是传统的western做法

至于成像仪这种比较新的,我也没做过,不太熟悉
2楼2015-08-31 11:58:09
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lxl1213: 金币+10, ★★★很有帮助, 有帮助哦 2015-09-07 15:04:04
传统的方法是PVDF膜+X光片曝光,需要暗室以及显影液、定影液,比较麻烦。现在有仪器,可以直接把杂交好的膜放在机器里,加入底物,直接可以曝光拍照的,比较方便~
3楼2015-08-31 13:03:19
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