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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot转膜
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烂铁

金虫 (小有名气)

[交流] 关于western blot转膜

最近开始做western blot，但是转膜这一步总是不成功，我用的是半干式转膜法，180mA和1h左右，100mA1.5h都试过了，根据转膜仪上面得说明，转膜时间已经足够了，可是丽春红染色后还是没有条带。
我用的滤纸是普通的滤纸（不是3mm滤纸），这会有影响么？另外我用的PVDF膜已经有一段时间了，这个会不会存在过期的问题？
希望大家帮助，谢谢！！
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1楼 2011-05-09 10:51:13
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:19:25
西瓜(金币+3): 热心噢 2011-05-09 17:55:41
引用回帖:
Originally posted by 烂铁 at 2011-05-09 12:01:16:
恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的

那你有没有预染marker，你可以用一下，看看是否是转膜这步出了问题。
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4楼2011-05-09 12:29:58
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你的膜活化了吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-09 11:57:24
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烂铁

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-05-09 11:57:24:
你的膜活化了吗？

恩，先用甲醇浸泡，然后用转膜缓冲液浸泡的
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 12:01:16
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
烂铁(金币+5): 2011-05-09 14:14:51
西瓜(金币+5, EPI+1): 厉害的新虫噢！偶注意你很久了！ 2011-05-09 17:57:58
做western blot，一般都是用预染Marker，转膜后如果膜上maker条带清晰的话，你要的蛋白样品一般都会转上的。用丽春红染不上色，很有可能是你样品蛋白含量比较少，条带不清晰，如果你的一抗效价比较高的话，同样能显出条带；还有一种可能就是你用的丽春红溶液用的次数过多，不好用了，如果是这种情况，建议新配一些丽春红染液试一下，不方便的话继续往下做就可以，看看最后结果再说。希望对楼主有所帮助！
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5楼2011-05-09 13:02:50
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