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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] PCR是阳性但酶切是阴性,怎么回事?

最近做一个菌液,是已经带有重组质粒的。这个经过PCR鉴定是阳性的,用PCR做杂交也没有问题,信号很强。
但是以这管菌放大摇菌后提取质粒,以质粒为模板的PCR产物来做杂交,信号就很弱甚至没有了。
于是重新划板摇菌提质粒,甚至重新做了克隆,以菌液或质粒为模板,PCR都能得到很亮的条带,但是酶切或杂交就是没有信号
请大家帮忙分析一下看看是怎么回事?杂交的实验我没涉及过啊,谢谢了谢谢了~
ps:可以肯定的是探针是没有问题的
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-22 17:38:14
有没有可能是PCR出来假阳性?条件和引物之类的不知道是不是早就摸索好了的,不然不至于酶切都切不动。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-04-22 15:22:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

可能以前做的人伪造数据,我就见过把照片PS之后放到硕士毕业论文上的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-04-23 01:40:17
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