24小时热门版块排行榜    

查看: 2557  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] PCR是阳性但酶切是阴性,怎么回事?

最近做一个菌液,是已经带有重组质粒的。这个经过PCR鉴定是阳性的,用PCR做杂交也没有问题,信号很强。
但是以这管菌放大摇菌后提取质粒,以质粒为模板的PCR产物来做杂交,信号就很弱甚至没有了。
于是重新划板摇菌提质粒,甚至重新做了克隆,以菌液或质粒为模板,PCR都能得到很亮的条带,但是酶切或杂交就是没有信号
请大家帮忙分析一下看看是怎么回事?杂交的实验我没涉及过啊,谢谢了谢谢了~
ps:可以肯定的是探针是没有问题的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

你的日子如何,你的力量也必如何!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

可能以前做的人伪造数据,我就见过把照片PS之后放到硕士毕业论文上的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-04-23 01:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-22 17:38:14
有没有可能是PCR出来假阳性?条件和引物之类的不知道是不是早就摸索好了的,不然不至于酶切都切不动。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-04-22 15:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-04-22 16:01:10
sxxuan(金币+1): 2011-04-22 20:08:04
PCR比较容易出假阳性结果的,质粒的鉴定还是要以酶切和测序为准。
3楼2011-04-22 15:32:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励! 2011-04-22 17:39:15
sxxuan(金币+3): 2011-04-22 20:09:07
首先你的PCR引物有没有Blast过,如果没有很可能你的PCR产物是非特异的扩增。第二,你的PCR模板用的是什么,DNA还是cDNA,可能你的引物扩出来的是内含子,cDNA的话建议RNA去完DNA再反转,这样比较保险。第三,引物设计最好是夸内含子的。纯属个人只谈,因为我之前也遇到过类似的问题,连接完了后,PCR和酶切都没有问题,结果测序一塌糊涂。呵呵,祝好运!
4楼2011-04-22 16:54:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见