24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

艾滋病癌症

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 249
散金: 35
红花: 2
帖子: 283
在线: 101.8小时
虫号: 848025
注册: 2009-09-14
性别: GG
专业: 天然药物化学

[求助] 急！！像这样的pcr结果怎么优化啊

本人因为毕业设计的缘故“被选择”了从未涉足的分子生物学方向

，很多经验是恶补不来的。今天跑出了如下图的结果，师兄让优化一下

但我小白一个，不太清楚从哪里入手。求指导

PS：marker是2000 的，750处是目的条带，它前面的三条比较纠结
我是50体系的，buffer5，dntp4,上下引物各2，模板1，酶0.5
合成单上的TM上71，下75
我用65度退火（60度也试过，效果不大）1分钟。30个循环

我想知道我目的条带前面的那三条分别是什么东西，怎么优化

。如果告诉我用退火温度跑个梯度出来，是不行的哦

[ Last edited by 艾滋病癌症 on 2011-4-22 at 13:41 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有288人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复
推荐一些基础有机化学的实验教程已经有0人回复
探秘高分子世界：链动微观，筑就材料新篇已经有0人回复
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验已经有0人回复
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心已经有0人回复
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用已经有0人回复
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石已经有0人回复
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。已经有11人回复
3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？已经有17人回复
SRAP-PCR 正交优化的胶，怎么统计条带？迷茫ing。。。已经有6人回复
PCR扩增产物电泳，退火温度优化已经有19人回复
关于real-time PCR温度优化的问题已经有6人回复
转基因植株DNA PCR检测要不就不出带，要不就连水和阴性对照都出带？？？急急急！！！已经有10人回复
【求助/交流】请教PCR条件优化已经有9人回复
【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。已经有15人回复
【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！已经有36人回复
【求助/交流】有没有人像我这样PCR一会做的出来一会又做不出来的已经有16人回复

欲善其事，必先利其器

1楼2011-04-22 13:40:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

专家经验: +57
MolEPI: 106
应助: 95 (初中生)
贵宾: 0.263
金币: 16382.3
散金: 593
红花: 74
沙发: 9
帖子: 3648
在线: 288.2小时
虫号: 441757
注册: 2007-10-27
专业: 微生物生理与生物化学
管辖: 微生物

【答案】应助回帖

★ ★
艾滋病癌症(金币+5): 这就按部就班的做。你说的这些对纯新人来说就是如降甘露啊，谢啦 2011-04-22 15:02:42
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励！天使继续加油啊~ 2011-04-22 15:29:11

1：你50ul体系不是很恰当，引物各加1ul，酶1ul,dNTP1ul,模板1ul，buffer5ul。
2：不知道你有没有做过温度梯度呢？就是看看哪一个问题下P出的条带是最亮的，然后选此温度大批量的进行扩增，如果没有，那么可以这样操作：首先两条引物的温度之和除以2，然后结果上下加减几度，就那你这两条引物来说吧，一个71，一个75，和除以2就是73，然后你可以做梯度：75 73 71 70 69 68 66等等。。。。看看哪一个温度下是最亮的。
3：750bp用一分钟就OK了，可以多循环一会，30个就行。。。。