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急！！像这样的pcr结果怎么优化啊
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本人因为毕业设计的缘故“被选择”了从未涉足的分子生物学方向 ，很多经验是恶补不来的。今天跑出了如下图的结果，师兄让优化一下 但我小白一个，不太清楚从哪里入手。求指导PS：marker是2000 的，750处是目的条带，它前面的三条比较纠结 我是50体系的，buffer5，dntp4,上下引物各2，模板1，酶0.5 合成单上的TM上71，下75 我用65度退火（60度也试过，效果不大）1分钟。30个循环 我想知道我目的条带前面的那三条分别是什么东西，怎么优化 。如果告诉我用退火温度跑个梯度出来，是不行的哦  [ Last edited by 艾滋病癌症 on 2011-4-22 at 13:41 ] |
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【答案】应助回帖
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艾滋病癌症(金币+5): 这就按部就班的做。你说的这些对纯新人来说就是如降甘露啊，谢啦 2011-04-22 15:02:42
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励！天使继续加油啊~ 2011-04-22 15:29:11
艾滋病癌症(金币+5): 这就按部就班的做。你说的这些对纯新人来说就是如降甘露啊，谢啦 2011-04-22 15:02:42
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励！天使继续加油啊~ 2011-04-22 15:29:11
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1：你50ul体系不是很恰当，引物各加1ul，酶1ul,dNTP1ul,模板1ul，buffer5ul。 2：不知道你有没有做过温度梯度呢？就是看看哪一个问题下P出的条带是最亮的，然后选此温度大批量的进行扩增，如果没有，那么可以这样操作：首先两条引物的温度之和除以2，然后结果上下加减几度，就那你这两条引物来说吧，一个71，一个75，和除以2就是73，然后你可以做梯度：75 73 71 70 69 68 66等等。。。。看看哪一个温度下是最亮的。 3：750bp用一分钟就OK了，可以多循环一会，30个就行。。。。 |
5楼2011-04-22 14:43:51
啊？我确实是继续做下去了，但是师兄要求我优化出一张漂亮的图来。。。。6楼2011-04-22 14:44:50
7楼2011-04-22 14:59:33
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8楼2011-04-22 15:50:33
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9楼2011-04-22 15:55:32
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