| 查看: 886 | 回复: 16 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
急！！像这样的pcr结果怎么优化啊
|
||||
本人因为毕业设计的缘故“被选择”了从未涉足的分子生物学方向 ，很多经验是恶补不来的。今天跑出了如下图的结果，师兄让优化一下 但我小白一个，不太清楚从哪里入手。求指导PS：marker是2000 的，750处是目的条带，它前面的三条比较纠结 我是50体系的，buffer5，dntp4,上下引物各2，模板1，酶0.5 合成单上的TM上71，下75 我用65度退火（60度也试过，效果不大）1分钟。30个循环 我想知道我目的条带前面的那三条分别是什么东西，怎么优化 。如果告诉我用退火温度跑个梯度出来，是不行的哦  [ Last edited by 艾滋病癌症 on 2011-4-22 at 13:41 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有65人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
-
推荐一些基础有机化学的实验教程
已经有0人回复
-
探秘高分子世界：链动微观，筑就材料新篇
已经有0人回复
-
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验
已经有0人回复
-
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心
已经有0人回复
-
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用
已经有0人回复
-
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我的PCR电泳图怎么这样的啊。。。
已经有11人回复- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- SRAP-PCR 正交优化的胶，怎么统计条带？迷茫ing。。。
已经有6人回复
- PCR扩增产物电泳，退火温度优化
已经有19人回复
- 关于real-time PCR温度优化的问题
已经有6人回复
- 转基因植株DNA PCR检测要不就不出带，要不就连水和阴性对照都出带？？？急急急！！！
已经有10人回复
- 【求助/交流】请教PCR条件优化
已经有9人回复
- 【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。
已经有15人回复
- 【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！
已经有36人回复
- 【求助/交流】有没有人像我这样PCR一会做的出来一会又做不出来的
已经有16人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16382.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3648
- 在线: 288.2小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★
艾滋病癌症(金币+5): 这就按部就班的做。你说的这些对纯新人来说就是如降甘露啊，谢啦 2011-04-22 15:02:42
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励！天使继续加油啊~ 2011-04-22 15:29:11
艾滋病癌症(金币+5): 这就按部就班的做。你说的这些对纯新人来说就是如降甘露啊，谢啦 2011-04-22 15:02:42
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励！天使继续加油啊~ 2011-04-22 15:29:11
|
1：你50ul体系不是很恰当，引物各加1ul，酶1ul,dNTP1ul,模板1ul，buffer5ul。 2：不知道你有没有做过温度梯度呢？就是看看哪一个问题下P出的条带是最亮的，然后选此温度大批量的进行扩增，如果没有，那么可以这样操作：首先两条引物的温度之和除以2，然后结果上下加减几度，就那你这两条引物来说吧，一个71，一个75，和除以2就是73，然后你可以做梯度：75 73 71 70 69 68 66等等。。。。看看哪一个温度下是最亮的。 3：750bp用一分钟就OK了，可以多循环一会，30个就行。。。。 |
5楼2011-04-22 14:43:51