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【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题已有5人参与
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酶切体系是越大越好吗？ 为什么我用EcoR I酶切，20ul体系加0.5ul酶的时候效果比200ul体系加2ul酶效果好？ 而且昨天用200ul体系切10ul的DNA没有切5ulDNA效果好 |
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西瓜
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8楼2011-04-14 12:07:22
西瓜
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): 继续努力 2011-04-14 13:57:18
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dhd997(金币+5): 继续努力 2011-04-14 13:57:18
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同一个体系的意思，是说里面各种成分的浓度一样。大体系、小体系，并不是说浓度不一样，而是说总的反应规模的大小。 大体系酶切，是因为酶切之后往往做胶回收等纯化，中间DNA损失比较多。所以开始切的DNA的量要多些（并等比例增加酶、buffer等成分），才能保证后续步骤有足量的DNA。 小体系连接，是因为连接产物需要量不多。转化的话，一点点连接产物就够了。所以，连接的DNA量不多，相应的buffer、酶用量就不多，就是说用小体系就足够了。 [ Last edited by 西瓜 on 2011-4-14 at 16:02 ] |
10楼2011-04-14 12:15:34