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nienie2008

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】电泳图求解

这是我PCR产物的电泳图，1.5Kbp目标条带非常淡，我刚学习做PCR，不知什么原因，请高手赐教如何优化PCR条件。
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1楼 2011-04-07 08:58:24
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
nienie2008(金币+1):谢谢参与
nienie2008(金币+1): 2011-04-07 10:55:55
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-04-07 11:33:08
引用回帖:
Originally posted by nienie2008 at 2011-04-07 08:58:24:
这是我PCR产物的电泳图，1.5Kbp目标条带非常淡，我刚学习做PCR，不知什么原因，请高手赐教如何优化PCR条件。

可以看出lz用的是2000 marker，本身marker的条带就不是很清晰。lz应该优化跑胶的条件。倒胶后室温凝固30分钟以上，同时降低电压。

至于PCR的过程，可以尝试降低退火温度试试。

扩增效率低的可以通过调整体系的组成来解决，可以参考一些相关的PCR条件优化，网上的相关内容很多。

另外，不知lz的延伸时间是多少？
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2楼2011-04-07 09:21:45
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holyala

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
nienie2008(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-04-07 11:33:27
貌似还有点smear？是非特异性扩增么？还是胶不干净...？如果是非特异性扩增的话，那就不能再降低退火温度了...LZ扩了多少个循环？
生物谷有个PCR专题，可以去看看
http://www.bioon.com/experiment/List_1719.shtml
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3楼2011-04-07 09:39:15
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szylnl

银虫 (小有名气)
★
nienie2008(金币+1):谢谢参与
重新做块胶 跑一下吧 这胶本身就不好
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4楼2011-04-07 10:17:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
nienie2008(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-07 11:33:51
一般Marker的带都有50ng，100ng，楼主这胶本来就不好，marker都这么暗，重新配了再跑胶吧。
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5楼2011-04-07 10:20:06
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