应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】real time PCR如何去掉杂峰
51/1返回列表
查看: 2157  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】real time PCR如何去掉杂峰

在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰，这个峰与需要的峰是相连的，请问是什么原因？如何解决！

谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-01 17:25:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by yangjianchen at 2011-04-01 17:25:14:
在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰，这个峰与需要的峰是相连的，请问是什么原因？如何解决！

谢谢

楼主你问题解决了没？呵呵~
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-26 00:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-01 20:02:24
yangjianchen(金币+1): 非常感谢，按照你的方法我再尝试下 2011-04-03 10:10:33
yangjianchen(金币+1): 2011-04-26 00:53:22
这个杂峰可能是非特异扩增的产物。可以尝试提高退火温度（如2℃），缩短延伸时间，降低引物浓度，降低镁离子浓度等方法。如不奏效，恐怕得重新设计引物了，尽量避免错配、引物二聚体的形成和发夹结构。
还有一个可能是基因组DNA的污染。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-01 19:24:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by yangjianchen at 2011-04-01 17:25:14:
在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰，这个峰与需要的峰是相连的，请问是什么原因？如何解决！

谢谢

……今晚做了个Real-time PCR，出现跟你一样的情况了，并且阴性对照也有扩增，且阴性对照的峰还跟样品的峰位置一样，得出的定量结果也跟预期的差好远。估计我的引物也不好。明天把退火温度从55提高到60试试……God bless me……
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-26 00:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

david_xmu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-04-26 18:56:22
在设计引物的时候，注意一下扩增产物的大小，虽然说扩增产物越小，PCR效率越高，但是太小的话，比如70~80bp左右，跟引物二聚体差不多大，这样即使产生了引物二聚体，也无法通过溶解曲线或者跑胶来区分开，我一般都设计成120~150 bp左右吧。仅供参考。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-04-26 05:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭