24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2333  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】real time PCR如何去掉杂峰

在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰,这个峰与需要的峰是相连的,请问是什么原因?如何解决!

谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by yangjianchen at 2011-04-01 17:25:14:
在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰,这个峰与需要的峰是相连的,请问是什么原因?如何解决!

谢谢

……今晚做了个Real-time PCR,出现跟你一样的情况了,并且阴性对照也有扩增,且阴性对照的峰还跟样品的峰位置一样,得出的定量结果也跟预期的差好远。估计我的引物也不好。明天把退火温度从55提高到60试试……God bless me……
3楼2011-04-26 00:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-01 20:02:24
yangjianchen(金币+1): 非常感谢,按照你的方法我再尝试下 2011-04-03 10:10:33
yangjianchen(金币+1): 2011-04-26 00:53:22
这个杂峰可能是非特异扩增的产物。可以尝试提高退火温度(如2℃),缩短延伸时间,降低引物浓度,降低镁离子浓度等方法。如不奏效,恐怕得重新设计引物了,尽量避免错配、引物二聚体的形成和发夹结构。
还有一个可能是基因组DNA的污染。
2楼2011-04-01 19:24:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by yangjianchen at 2011-04-01 17:25:14:
在做定量PCR的时候溶解曲线中所要的峰旁边出现了一个稍低一点的峰,这个峰与需要的峰是相连的,请问是什么原因?如何解决!

谢谢

楼主你问题解决了没?呵呵~
4楼2011-04-26 00:57:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

david_xmu

金虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-04-26 18:56:22
在设计引物的时候,注意一下扩增产物的大小,虽然说扩增产物越小,PCR效率越高,但是太小的话,比如70~80bp左右,跟引物二聚体差不多大,这样即使产生了引物二聚体,也无法通过溶解曲线或者跑胶来区分开,我一般都设计成120~150 bp左右吧。仅供参考。
5楼2011-04-26 05:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 332求调剂 +15 蕉蕉123 2026-04-10 15/750 2026-04-13 23:12 by pies112
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 368化学求调剂 +14 wwwwabcde 2026-04-07 15/750 2026-04-13 08:36 by lhj2009
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 291分调剂 +5 上岸小莹加油 2026-04-09 6/300 2026-04-11 21:06 by 逆水乘风
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 一志愿211,化学310分,本科重点双非,求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
请填处理意见