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xiaojing459

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.5
帖子: 139
在线: 5.8小时
虫号: 301998

[交流] 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！

求助：我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上，老是连接失败，挑不到阳性克隆，麻烦有经验的帮我想想办法，提些建议，多谢！

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1楼 2011-03-31 21:09:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1626.1
帖子: 991
在线: 82小时
虫号: 287776

★ ★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-04-01 20:01:27

1、连个小片段，做阳性对照，片段不是pfu扩增的吧？
2、延长连接时间到16hours
3、在连接了8hour后加点atp和酶
试试看行不行

赞一下(2人)

5楼2011-04-01 09:46:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 14 个回答

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与

看看是不是犯了低级错误

赞一下(1人)

2楼2011-03-31 21:27:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8186.6
帖子: 4028
在线: 138.6小时
虫号: 775490

★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与

可能操作上有点小问题

赞一下(1人)

3楼2011-03-31 22:05:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-01 08:46:26

当时连过4K+的也没成功，不知道是不是T载承载能力不够的原因。

赞一下(2人)

4楼2011-03-31 22:15:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 14 个回答

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