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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！
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xiaojing459

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！

求助：我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上，老是连接失败，挑不到阳性克隆，麻烦有经验的帮我想想办法，提些建议，多谢！
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1楼 2011-03-31 21:09:08
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-04-01 20:01:27
1、连个小片段，做阳性对照，片段不是pfu扩增的吧？
2、延长连接时间到16hours
3、在连接了8hour后加点atp和酶
试试看行不行
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5楼2011-04-01 09:46:11
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)
★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
看看 是不是犯了低级错误
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-31 21:27:57
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soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)
★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
可能操作上有点小问题
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-31 22:05:25
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-01 08:46:26
当时连过4K+的也没成功，不知道是不是T载承载能力不够的原因。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-31 22:15:09
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