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xiaojing459

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】求助:5.5KPCR片段连接难,请教!!

求助:我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上,老是连接失败,挑不到阳性克隆,麻烦有经验的帮我想想办法,提些建议,多谢!
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jasco

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-04-01 20:01:27
1、连个小片段,做阳性对照,片段不是pfu扩增的吧?
2、延长连接时间到16hours
3、在连接了8hour后加点atp和酶
试试看行不行
5楼2011-04-01 09:46:11
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xiaojing459(金币+3):谢谢参与
看看 是不是犯了低级错误
2楼2011-03-31 21:27:57
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soarfalcon8808

铁杆木虫 (职业作家)



xiaojing459(金币+3):谢谢参与
可能操作上有点小问题
3楼2011-03-31 22:05:25
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★ ★ ★
xiaojing459(金币+3):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-04-01 08:46:26
当时连过4K+的也没成功,不知道是不是T载承载能力不够的原因。
4楼2011-03-31 22:15:09
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