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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 已有23人参与

怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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1楼 2011-03-28 18:52:28
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
本帖内容被屏蔽
2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节，好让大家帮你分析
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事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复：我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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4楼2011-03-29 09:12:05
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-03-28 20:00:30:
从哪里提，用的什么方法咧？？？

我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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5楼2011-03-29 09:14:16
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 河外生命 at 2011-03-28 21:39:19:
说下实验细节，好让大家帮你分析

回复：我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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6楼2011-03-29 09:14:44
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jjlbest

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 说说方法 2011-04-21 12:54:47
基因组提取关键是在于菌体的破裂，感觉楼主应该想办法破解细胞！
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7楼2011-03-29 20:42:12
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 和楼上一样 2011-04-21 12:55:06
首先考虑是细胞破碎。如果没问题，可以用乙醇代替异丙醇沉淀DNA，沉淀时间延长
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8楼2011-03-29 22:11:27
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+1): yes 2011-03-30 08:20:04
1949stone(金币+2): 白菜也好贵啊 2011-04-21 12:55:21
直接用kit提……现在提DNA的试剂盒都白菜价了
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9楼2011-03-29 22:24:50
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jjlbest at 2011-03-29 20:42:12:
基因组提取关键是在于菌体的破裂，感觉楼主应该想办法破解细胞！

我跑电泳的时候，里面有RNA的带，一点DNA都没有，可是只要有RNA出现是不是就是说破壁没问题啊？我用的缓冲溶液也是按好几篇文献一样我才配的，再麻烦给想一下！！！
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10楼2011-03-30 15:36:30
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