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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 【求助/交流】关于质粒转化，求高手指导！！（附图）
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djrhewc

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于质粒转化，求高手指导！！（附图） 已有2人参与

最近一直在做质粒连接转化，遇到一些问题，求指导
载体是takala的pmd18-t      连接的片段大小为1700-1800bp，pcr后经切胶回收纯化，如图

做完连接转化后涂板，取白色菌落做菌落pcr，引物为M13-47 & RV-M，电泳图片如图所示（Marker为DL5000），扩增出的长度快接近3000bp了，

请问这是什么情况？


（另外一张图为对照试验，500bp片段连入载体菌落pcr结果约为680左右，基本正常）

[ Last edited by djrhewc on 2011-3-24 at 20:21 ]
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1楼 2011-03-24 20:20:05
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djrhewc

银虫 (小有名气)
自己顶一下
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2楼2011-03-24 20:32:40
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flemingo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-03-25 08:24:19
受体菌基因组上有和你引物匹配的区段吧，建议换一对引物试试。或者尝试用扩增基因的引物和载体两端的引物搭配使用（不要都用扩基因的引物）。

你的第二张图marker右边4、5号泳道下面的条带貌似大小正确，不妨挑出来测个序。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-03-24 20:42:47
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djrhewc

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by flemingo at 2011-03-24 20:42:47:
受体菌基因组上有和你引物匹配的区段吧，建议换一对引物试试。或者尝试用扩增基因的引物和载体两端的引物搭配使用（不要都用扩基因的引物）。

你的第二张图marker右边4、5号泳道下面的条带貌似大小正确，不妨挑 ...

你好，2个问题
1.受体菌是感受态的DH5α，引物为pmd18-t上的通用引物M13-47 和RV-M，这些都是很常见的做法了，应该不会扩出大肠杆菌基因组上的片段吧...
2. 第二张图4,5泳道调菌至液体培养基送菌液测序的话，里面有2条带，是不是测序时会相互影响测不出来？
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4楼2011-03-24 21:34:33
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djrhewc

银虫 (小有名气)
有人能指点下么？
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5楼2011-03-24 22:07:17
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