24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1037  |  回复: 4

djrhewc

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于质粒转化,求高手指导!!(附图) 已有2人参与

最近一直在做质粒连接转化,遇到一些问题,求指导
载体是takala的pmd18-t      连接的片段大小为1700-1800bp,pcr后经切胶回收纯化,如图

做完连接转化后涂板,取白色菌落做菌落pcr,引物为M13-47 & RV-M,电泳图片如图所示(Marker为DL5000),扩增出的长度快接近3000bp了,

请问这是什么情况?


(另外一张图为对照试验,500bp片段连入载体菌落pcr结果约为680左右,基本正常)

[ Last edited by djrhewc on 2011-3-24 at 20:21 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)

自己顶一下
2楼2011-03-24 20:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flemingo

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-03-25 08:24:19
受体菌基因组上有和你引物匹配的区段吧,建议换一对引物试试。或者尝试用扩增基因的引物和载体两端的引物搭配使用(不要都用扩基因的引物)。

你的第二张图marker右边4、5号泳道下面的条带貌似大小正确,不妨挑出来测个序。
3楼2011-03-24 20:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by flemingo at 2011-03-24 20:42:47:
受体菌基因组上有和你引物匹配的区段吧,建议换一对引物试试。或者尝试用扩增基因的引物和载体两端的引物搭配使用(不要都用扩基因的引物)。

你的第二张图marker右边4、5号泳道下面的条带貌似大小正确,不妨挑 ...

你好,2个问题
1.受体菌是感受态的DH5α,引物为pmd18-t上的通用引物M13-47 和RV-M,这些都是很常见的做法了,应该不会扩出大肠杆菌基因组上的片段吧...
2. 第二张图4,5泳道调菌至液体培养基送菌液测序的话,里面有2条带,是不是测序时会相互影响测不出来?
4楼2011-03-24 21:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)

有人能指点下么?
5楼2011-03-24 22:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 djrhewc 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工371求调剂 +16 陪琳看海 2026-04-04 17/850 2026-04-09 23:27 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +9 代fish 2026-04-09 9/450 2026-04-09 21:46 by bljnqdcc
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +4 天下ww 2026-04-09 4/200 2026-04-09 21:28 by bljnqdcc
[考研] 283求调剂,工科! +8 苏打水7777 2026-04-08 8/400 2026-04-09 20:50 by xujun0624
[考研] 一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂 +16 招61排名62 2026-04-07 19/950 2026-04-09 20:44 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂 +8 只叙离别辞 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:25 by zl8213662
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 机械工程264学硕求调剂 +3 qiushangxian 2026-04-06 3/150 2026-04-08 01:53 by Linzejun
[考研] 复试调剂 +9 春日来信- 2026-04-03 9/450 2026-04-07 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 080500求调剂 +12 黄宇博 2026-04-06 12/600 2026-04-07 12:41 by upczlm1989
[考研] 295求调剂 +18 xndjjj 2026-04-04 19/950 2026-04-07 11:02 by wangjy2002
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +13 洛神哥哥 2026-04-03 13/650 2026-04-05 17:27 by zzx2138
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见