24小时热门版块排行榜    

查看: 978  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】该死的酶切 已有5人参与

用BamH1酶切载体和一段500左右的PCR产物,连接重组质粒后,提取鉴定。
还是用bamH1切。理应是出来的片段是500左右的。但是除了载体的条带外,在1.5K处还有一条很亮的条带。跟载体的亮度是一致的。
最近总是遇到莫名其妙的问题,不知道怎么回事。

请帮帮忙


可以确定载体里没有其他的bamh1位点了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

世道再难,也要呼吸顺畅。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是很奇怪耶,就算是PCR产物连一起了,酶切也能切开啊~~~
关注~~~
修炼ing,当虫仙……
7楼2011-03-12 10:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-12 09:30:43
就是说你载体和PCR片段都有2个BamHI位点咯?
难道是连接的时候,3个PCR片段连在一起的概率也很大了?刚好1.5k。。。
如果我没理解错,建议克隆用2种酶吧

BTW,酶切验证时候500bp的目的条带有吗

[ Last edited by gongeleven on 2011-3-11 at 23:42 ]
2楼2011-03-11 23:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-12 09:30:53
1 ,推荐用两种酶切连接
2,你单酶切连接应该要做载体去磷酸化处理,不知道你做了没
3,PCR产物直接酶切连接有时候不靠谱,可以先TA连接到T载体或者平末端载体。然后酶切下来连目标载体。
3楼2011-03-12 09:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)

双酶切保险

设计加酶切位点的引物重扩,双酶切

[ Last edited by poog502 on 2011-3-12 at 09:32 ]
4楼2011-03-12 09:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +3 zxts12 2026-03-21 3/150 2026-03-21 16:34 by 33来了真来了
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸! 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
信息提示
请填处理意见