24小时热门版块排行榜    

查看: 1214  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】该死的酶切 已有5人参与

用BamH1酶切载体和一段500左右的PCR产物,连接重组质粒后,提取鉴定。
还是用bamH1切。理应是出来的片段是500左右的。但是除了载体的条带外,在1.5K处还有一条很亮的条带。跟载体的亮度是一致的。
最近总是遇到莫名其妙的问题,不知道怎么回事。

请帮帮忙


可以确定载体里没有其他的bamh1位点了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

世道再难,也要呼吸顺畅。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是很奇怪耶,就算是PCR产物连一起了,酶切也能切开啊~~~
关注~~~
修炼ing,当虫仙……
7楼2011-03-12 10:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-12 09:30:43
就是说你载体和PCR片段都有2个BamHI位点咯?
难道是连接的时候,3个PCR片段连在一起的概率也很大了?刚好1.5k。。。
如果我没理解错,建议克隆用2种酶吧

BTW,酶切验证时候500bp的目的条带有吗

[ Last edited by gongeleven on 2011-3-11 at 23:42 ]
2楼2011-03-11 23:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-12 09:30:53
1 ,推荐用两种酶切连接
2,你单酶切连接应该要做载体去磷酸化处理,不知道你做了没
3,PCR产物直接酶切连接有时候不靠谱,可以先TA连接到T载体或者平末端载体。然后酶切下来连目标载体。
3楼2011-03-12 09:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)

双酶切保险

设计加酶切位点的引物重扩,双酶切

[ Last edited by poog502 on 2011-3-12 at 09:32 ]
4楼2011-03-12 09:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见