应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】该死的酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 993  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】该死的酶切 已有5人参与

用BamH1酶切载体和一段500左右的PCR产物，连接重组质粒后，提取鉴定。
还是用bamH1切。理应是出来的片段是500左右的。但是除了载体的条带外，在1.5K处还有一条很亮的条带。跟载体的亮度是一致的。
最近总是遇到莫名其妙的问题，不知道怎么回事。

请帮帮忙


可以确定载体里没有其他的bamh1位点了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
世道再难，也要呼吸顺畅。
1楼 2011-03-11 22:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-12 09:30:43
就是说你载体和PCR片段都有2个BamHI位点咯？
难道是连接的时候，3个PCR片段连在一起的概率也很大了？刚好1.5k。。。
如果我没理解错，建议克隆用2种酶吧

BTW，酶切验证时候500bp的目的条带有吗

[ Last edited by gongeleven on 2011-3-11 at 23:42 ]
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-11 23:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-12 09:30:53
1 ，推荐用两种酶切连接
2，你单酶切连接应该要做载体去磷酸化处理，不知道你做了没
3，PCR产物直接酶切连接有时候不靠谱，可以先TA连接到T载体或者平末端载体。然后酶切下来连目标载体。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-03-12 09:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
双酶切保险

设计加酶切位点的引物重扩，双酶切

[ Last edited by poog502 on 2011-3-12 at 09:32 ]
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-12 09:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-03-11 23:39:10:
就是说你载体和PCR片段都有2个BamHI位点咯？
难道是连接的时候，3个PCR片段连在一起的概率也很大了？刚好1.5k。。。
如果我没理解错，建议克隆用2种酶吧

BTW，酶切验证时候500bp的目的条带有吗

[ Last e ...

已经做了去磷酸化。
赞一下 回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
5楼2011-03-12 10:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-03-11 23:39:10:
就是说你载体和PCR片段都有2个BamHI位点咯？
难道是连接的时候，3个PCR片段连在一起的概率也很大了？刚好1.5k。。。
如果我没理解错，建议克隆用2种酶吧

BTW，酶切验证时候500bp的目的条带有吗

[ Last e ...

但是很奇怪的一点是1.5KB的条带很亮，跟载体差不多。不像是切下来的。这是怎么回事，我酶切的时间挺短的
赞一下 回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
6楼2011-03-12 10:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是很奇怪耶，就算是PCR产物连一起了，酶切也能切开啊~~~
关注~~~
赞一下(1人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2011-03-12 10:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alexguo221 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西安交大材料学硕（英一数二）347，求调剂到高分子/材料相关专业 +4 zju51 2026-03-31 6/300 2026-03-31 21:56 by lbsjt
[考研] 309求调剂 +5 gajsj 2026-03-25 6/300 2026-03-31 21:12 by yuq
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +11 柳溪边 2026-03-26 12/600 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 生物学296求调剂 +8 汤圆包 2026-03-29 12/600 2026-03-31 17:05 by 18828373951
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 材料科学与工程调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-30 14/700 2026-03-31 16:28 by hypershenger
[考研] 生物学 296 求调剂 +7 朵朵- 2026-03-26 9/450 2026-03-31 14:26 by jp9609
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 0703化学 +20 妮妮ninicgb 2026-03-27 20/1000 2026-03-31 13:33 by 无际的草原
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-03-30 12/600 2026-03-31 11:00 by 熊一刀
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 4/200 2026-03-31 10:20 by cal0306
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 0817化工学硕调剂 +7 努力上岸中！ 2026-03-31 7/350 2026-03-31 09:58 by nalakaiqi
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +11 麻辣鱿鱼 2026-03-27 12/600 2026-03-30 19:33 by Wang200018
[考研] 0703化学321分求调剂 +10 三dd. 2026-03-30 11/550 2026-03-30 19:24 by markhwc
[考研] 求调剂 +4 QiMing7 2026-03-25 5/250 2026-03-29 21:10 by 唐沐儿
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭