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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于蛋白纯化透析的问题
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jyh024

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于蛋白纯化透析的问题

我现在做蛋白纯化透析，用的是Ni柱纯化His-tag，最佳洗脱条件是150-250mM咪唑，做酶活测定是不是需要将咪唑去掉？如果需要用透析膜透析好还是用超滤管浓缩再补加buffer进行稀释后重复？大体积超滤过程中隔段时间是否需要将底部蛋白用枪尖吹起后再超滤？否则我发现超滤速度很慢。枪尖吹吸是否有什么操作规范？我怕对蛋白造成较大损伤。
谢谢指点！
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1楼2011-03-01 15:27:39
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laoshu16

银虫 (小有名气)
jyh024(金币+1): 2011-03-02 09:27:31
感觉透析时间长，还要冰浴吧 超滤损失还不小 也很慢 我们都是AKTA做脱盐
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2楼2011-03-01 17:03:34
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-01 19:33:56
jyh024(金币+3): 谢谢指点！ 2011-03-02 09:27:47
jyh024(金币+1): 2011-04-25 17:12:14
引用回帖:
Originally posted by jyh024 at 2011-03-01 15:27:39:
我现在做蛋白纯化透析，用的是Ni柱纯化His-tag，最佳洗脱条件是150-250mM咪唑，做酶活测定是不是需要将咪唑去掉？如果需要用透析膜透析好还是用超滤管浓缩再补加buffer进行稀释后重复？大体积超滤过程中隔段时间是 ...

恩，有AKTA的话过个脱盐柱就好了。测酶活一般是要去咪唑的，用透析袋做比较温和，主要是有些蛋白在浓缩过程中会沉淀。

枪尖吹打的时候要柔和匀速，不要太剧烈。不过貌似有的酶很皮实。

尽量不要搞出气泡。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-3-1 at 17:16 ]
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3楼2011-03-01 17:15:28
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