24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jyh024

木虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 4818
帖子: 514
在线: 127小时
虫号: 1127493

[交流] 【求助/交流】关于蛋白纯化透析的问题

我现在做蛋白纯化透析，用的是Ni柱纯化His-tag，最佳洗脱条件是150-250mM咪唑，做酶活测定是不是需要将咪唑去掉？如果需要用透析膜透析好还是用超滤管浓缩再补加buffer进行稀释后重复？大体积超滤过程中隔段时间是否需要将底部蛋白用枪尖吹起后再超滤？否则我发现超滤速度很慢。枪尖吹吸是否有什么操作规范？我怕对蛋白造成较大损伤。
谢谢指点！

回复此楼

» 猜你喜欢

SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有19人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有270人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-03-01 15:27:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-01 19:33:56
jyh024(金币+3): 谢谢指点！ 2011-03-02 09:27:47
jyh024(金币+1): 2011-04-25 17:12:14

引用回帖:

Originally posted by jyh024 at 2011-03-01 15:27:39:
我现在做蛋白纯化透析，用的是Ni柱纯化His-tag，最佳洗脱条件是150-250mM咪唑，做酶活测定是不是需要将咪唑去掉？如果需要用透析膜透析好还是用超滤管浓缩再补加buffer进行稀释后重复？大体积超滤过程中隔段时间是 ...

恩，有AKTA的话过个脱盐柱就好了。测酶活一般是要去咪唑的，用透析袋做比较温和，主要是有些蛋白在浓缩过程中会沉淀。

枪尖吹打的时候要柔和匀速，不要太剧烈。不过貌似有的酶很皮实。

尽量不要搞出气泡。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-3-1 at 17:16 ]