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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！ 已有9人参与

做PCR扩增，结果出现如图的情况，我都不知道怎么分析了，请大家帮帮忙，谢谢！
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2011-02-24 16:47:12
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
说详细点啊，片段多大等等
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2楼2011-02-24 16:50:04
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-02-24 16:50:04:
说详细点啊，片段多大等等

不好意思啊没说清楚。
这是由两个模板拼接在一起的，片段大小450左右，marker是100bp的～
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你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2011-02-24 17:20:40
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★
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翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-24 19:54:20
这拖尾现象也太严重了，或者说DNA已经被破坏成梯度化
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风雪夜归人
4楼2011-02-24 19:06:37
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fengweixing00

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-02-24 21:49:20
应该是没成功吧，反正测序肯定不行，没有单一明亮的带建议重新设计引物并把模板也检测一下，看看有没有降解。
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5楼2011-02-24 21:14:22
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hzkui602

新虫 (初入文坛)
胶可能没制好！
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6楼2011-02-24 21:33:05
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wqj1988926 at 2011-02-24 19:06:37:
这拖尾现象也太严重了，或者说DNA已经被破坏成梯度化

我也怀疑是模板被降解了，不过前一天下午才扩增出来的模板，而且是放在-80保存，第二天马上就上机了
不过体系是前一天配好的，有没有关系？
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你的日子如何，你的力量也必如何！
7楼2011-02-25 11:09:41
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hzkui602 at 2011-02-24 21:33:05:
胶可能没制好！

marker好像也有一点拖尾，不过看起来还好
会不会是电泳缓冲液用太久了？因为胶不是我配的也不是我跑的，所以这些原因我都不能排除
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你的日子如何，你的力量也必如何！
8楼2011-02-25 11:11:44
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-24 16:47:12:
做PCR扩增，结果出现如图的情况，我都不知道怎么分析了，请大家帮帮忙，谢谢！

PCR条件：94度预变性 2min，93度30s，55度30s，72度30s，35 cycles，最后72度延伸7min

MBI体系，酶是Fementas的taq 酶吧

下机后就用2%的胶去跑～
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你的日子如何，你的力量也必如何！
9楼2011-02-25 11:17:21
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 14:05:55
有可能是缓冲液的时间太久，我们实验室有人好像遇到过这样的问题
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风雪夜归人
10楼2011-02-25 11:19:16
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