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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by woshishao at 2011-02-26 21:06:28:
看图,这个就是融合PCR,你说你是把两个基因拼成已个基因,应该就是融合PCR了。这种PCR是这样的,引物特异性问题有点不好把握,容易出现这种情况。而且就算扩增出目的条带,也比较浅,建议使用80V来跑电泳,而且多 ...

啊,做到就是这种PCR,实在太感谢了!
你的日子如何,你的力量也必如何!
21楼2011-02-28 09:18:50
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-02-25 17:46:10:
谁说新合成就一定好了,引物合成之后是要纯化的,纯化不好的就出你这种smear

原来这样啊,引物都是公司自己合成的~
你的日子如何,你的力量也必如何!
22楼2011-02-28 09:21:35
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 鼓励交流 2011-02-28 12:53:11
我以前遇到过这样的问题,我做的是SSR,我分析是产物被降解了,可能的原因是不是你反应程序有问题;如果是全基因组的PCR,也有可能模板被降解,建议你再做一次PCR,并且做个对照,同时电泳时用小孔梳子,电泳时间长一些,呵呵

还有你的预变性好像太短了些,我们一般用5分钟,如果是全基因组的话

[ Last edited by leiyunting on 2011-2-28 at 10:56 ]
云海漾空阔,风露凛高寒;何必在波涛,然后惊沉浮。
23楼2011-02-28 10:53:42
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-02-25 13:00:50:
换引物吧,是引物降解了

这个也有可能,不过一般都没有结果的吧
云海漾空阔,风露凛高寒;何必在波涛,然后惊沉浮。
24楼2011-02-28 10:59:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by leiyunting at 2011-02-28 10:59:43:
这个也有可能,不过一般都没有结果的吧

一般都没有结果?什么意思?
你的日子如何,你的力量也必如何!
25楼2011-02-28 15:29:32
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sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by leiyunting at 2011-02-28 10:53:42:
我以前遇到过这样的问题,我做的是SSR,我分析是产物被降解了,可能的原因是不是你反应程序有问题;如果是全基因组的PCR,也有可能模板被降解,建议你再做一次PCR,并且做个对照,同时电泳时用小孔梳子,电泳时间 ...

好像用MBI的酶系,就定了这个反应体系,平时做的PCR预变性都是5分钟~
你的日子如何,你的力量也必如何!
26楼2011-02-28 15:30:31
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-28 15:29:32:
一般都没有结果?什么意思?

我的意思是引物可能降解成单碱基,不会又PCR产物出现;但是也有可能降解成小片段,所以也可能出现产物,结果就如有拖尾的结果
云海漾空阔,风露凛高寒;何必在波涛,然后惊沉浮。
27楼2011-02-28 16:13:55
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛

引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-28 15:30:31:
好像用MBI的酶系,就定了这个反应体系,平时做的PCR预变性都是5分钟~

哦,那可能体系就没问题
云海漾空阔,风露凛高寒;何必在波涛,然后惊沉浮。
28楼2011-02-28 16:14:24
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