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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请大家帮忙分析一下PCR结果，谢谢！
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by woshishao at 2011-02-26 21:06:28:
看图，这个就是融合PCR，你说你是把两个基因拼成已个基因，应该就是融合PCR了。这种PCR是这样的，引物特异性问题有点不好把握，容易出现这种情况。而且就算扩增出目的条带，也比较浅，建议使用80V来跑电泳，而且多 ...

啊，做到就是这种PCR，实在太感谢了！
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你的日子如何，你的力量也必如何！
21楼2011-02-28 09:18:50
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-02-25 17:46:10:
谁说新合成就一定好了，引物合成之后是要纯化的，纯化不好的就出你这种smear

原来这样啊，引物都是公司自己合成的～
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22楼2011-02-28 09:21:35
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛
★ ★ ★
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翱宇(金币+2): 鼓励交流 2011-02-28 12:53:11
我以前遇到过这样的问题，我做的是SSR，我分析是产物被降解了，可能的原因是不是你反应程序有问题；如果是全基因组的PCR，也有可能模板被降解，建议你再做一次PCR，并且做个对照，同时电泳时用小孔梳子，电泳时间长一些，呵呵

还有你的预变性好像太短了些，我们一般用5分钟，如果是全基因组的话

[ Last edited by leiyunting on 2011-2-28 at 10:56 ]
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云海漾空阔，风露凛高寒；何必在波涛，然后惊沉浮。
23楼2011-02-28 10:53:42
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2011-02-25 13:00:50:
换引物吧，是引物降解了

这个也有可能，不过一般都没有结果的吧
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24楼2011-02-28 10:59:43
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by leiyunting at 2011-02-28 10:59:43:
这个也有可能，不过一般都没有结果的吧

一般都没有结果？什么意思？
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25楼2011-02-28 15:29:32
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by leiyunting at 2011-02-28 10:53:42:
我以前遇到过这样的问题，我做的是SSR，我分析是产物被降解了，可能的原因是不是你反应程序有问题；如果是全基因组的PCR，也有可能模板被降解，建议你再做一次PCR，并且做个对照，同时电泳时用小孔梳子，电泳时间 ...

好像用MBI的酶系，就定了这个反应体系，平时做的PCR预变性都是5分钟～
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26楼2011-02-28 15:30:31
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-28 15:29:32:
一般都没有结果？什么意思？

我的意思是引物可能降解成单碱基，不会又PCR产物出现；但是也有可能降解成小片段，所以也可能出现产物，结果就如有拖尾的结果
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27楼2011-02-28 16:13:55
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leiyunting

木虫 (著名写手)

云海波涛
引用回帖:
Originally posted by sxxuan at 2011-02-28 15:30:31:
好像用MBI的酶系，就定了这个反应体系，平时做的PCR预变性都是5分钟～

哦，那可能体系就没问题
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28楼2011-02-28 16:14:24
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