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李金平

铜虫 (正式写手)


[交流] 【求助】进空白时的干扰峰影响

各位做液相色谱的大哥大姐们,请问这种情况你们遇到过吗?
    流动相A:2g的Na2HPO4溶于1000ml纯化水中,用85%的磷酸调PH值至2.2。
    流动相B:甲醇
    溶剂:(50:50/甲醇:乙腈):流动相A=20:80
    用的梯度洗脱
   Time(min)        流动相A        流动相B
          0                            80             20
          5                            80             20
         18                            60              40
         37                            60              40
         38                             80               20
         45                             80               20
   目前出现的情况是:
   (1)在主峰出峰的位置,溶剂峰有个鼓包,影响主峰的检测。
   所采取的措施:
    (1)配流动相A时,分别换Na2HPO4不同的厂家(天津凯通,北京精求),以及含结晶水的Na2HPO4;且加热Na2HPO4溶液;以及纯化水分别用公司里的纯化水及娃哈哈水。溶剂仍有鼓包。
     (2)不进溶剂,直接走空针。在主峰位置仍有鼓包。
      (3)由于怀疑是针上的样品残留,便换了六通阀及进样针,然后运行空针,发现:主峰位置仍有鼓包,说明不是针上样品的残留。
      (4) 分别单独进50:50/甲醇:乙腈和流动相A,主峰位置有鼓包。
       (5)不用梯度,直接用流动相A:流动相B=80:20进空针,主峰位置无鼓包。
               直接用流动相A:流动相B=60:40进空针,主峰位置无鼓包。
      这个方法是国外客户给的,看他们的图谱没发现有这个问题,但我们通过不同的机子,不同的人,以及在公司里面不同的实验室,都有鼓包出现的问题,做了这些感觉像是流动相在走梯度时,由于流动相混合所产生的,但也不能完全就能得出结论。
     各位大侠们能不能帮帮忙呀,多出出主意,或者是在做时是否也遇到过这种问题?谢谢了。
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不同的机子,不同的人,以及在公司里面不同的实验室,都有鼓包出现的问题


方法(梯度)问题吧?

[ Last edited by 痴夷子皮 on 2011-2-21 at 16:36 ]
2楼2011-02-21 16:33:25
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)



是不是主峰位置前流动相比例刚发生变化了
3楼2011-02-22 07:55:52
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李金平

铜虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by lemonin2008 at 2011-02-21 23:55:52:
是不是主峰位置前流动相比例刚发生变化了

主峰是在25min出峰,鼓包也是在这时出来,这一段是在60:40的等度变化。
4楼2011-02-22 08:18:08
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)


李金平(金币+1): 2011-04-25 18:23:38

色谱柱用的一直一样吗
会不会是色谱柱上残留的东西,只有在梯度情况下才能洗脱出来
5楼2011-02-22 09:05:59
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李金平

铜虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by lemonin2008 at 2011-02-22 01:05:59:
色谱柱用的一直一样吗
会不会是色谱柱上残留的东西,只有在梯度情况下才能洗脱出来

我们有三根同样的色谱柱,都遇到了类似的问题,这个鼓包是在25min处出的峰,它已经在等度处了(流动相A:流动相B=60:40),并且一直用流动相A:流动相B=60:40这个等度走样,不用梯度,却不会有鼓包出现。
6楼2011-02-22 09:39:08
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1414671343

金虫 (正式写手)


李金平(金币+1): 2011-04-25 18:23:46

我觉得你调调流动相的PH 把主峰的处峰时间 延后 或者提前下 看看那?
鼓包也会跟着走不成?
7楼2011-02-22 11:07:21
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李金平

铜虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 1414671343 at 2011-02-22 03:07:21:
我觉得你调调流动相的PH 把主峰的处峰时间 延后 或者提前下 看看那?
鼓包也会跟着走不成?

把流速调高为1.2ml/min,这个鼓包的出峰时间也往前提。
8楼2011-02-22 11:36:09
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)



鼓包的大小都一样吗
9楼2011-02-22 16:26:19
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shesui

金虫 (正式写手)



这个鼓包会不会就是你的样品中所含杂质啊
10楼2011-02-22 17:09:46
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李金平

铜虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by shesui at 2011-02-22 17:09:46:
这个鼓包会不会就是你的样品中所含杂质啊

不是,因为没进样品的时候也有这个鼓包。
11楼2011-02-24 18:35:43
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xhp1983

铁虫 (正式写手)


李金平(金币+1): 2011-04-25 18:24:35
我们实验室一同学在跑standard时也出现同样问题,换了柱子、检测器、流动相,甚至不进standard,只进甲醇,那几个峰都存在,且不管standard进了多少量,那几个杂峰的响应值都不变,非常稳定~所以我觉得不是样品中的杂质问题~
同求解~多谢!
12楼2011-02-26 04:25:58
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shyron

木虫 (正式写手)


李金平(金币+1): 2011-04-25 18:25:20
能看得出来,楼主做了大量的实验,但是得出以上的结论,都是经过多次重复确定的吗?以前我也遇到过这个问题,我以为是进样针或者六通阀地方样品残留,所以也没有细究。但是这个峰一般都很小,基本上在液相的允许误差范围内,所以如果不影响结果的话,不必深究。
13楼2011-02-28 01:04:59
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zhaoyao1018

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
跟我遇到的情况一样,我们也是在主峰位置老是有干扰峰,进空针,采用新色谱柱、新仪器也有
14楼2013-04-23 23:15:11
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岳亮63

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhaoyao1018 at 2013-04-23 23:15:11
跟我遇到的情况一样,我们也是在主峰位置老是有干扰峰,进空针,采用新色谱柱、新仪器也有

那亲后来是怎样解决这个问题的呢
15楼2014-05-26 15:27:48
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
两种可能:
梯度变化导致的
系统或色谱柱带进去的杂质
16楼2014-05-27 15:58:14
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1058857684

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主最后怎么解决的?我遇到了相似的问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
17楼2015-10-22 15:46:37
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