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30937747

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】酶切不出结果

我将一个质粒热转至E.coli中扩增后,用EcoRⅠ酶切鉴定正确.将鉴定正确的质粒电转至农杆菌,在抗性平板上筛选扩增后,提取出来的质粒用EcoRⅠ再次鉴定,却怎么也切不开,条带从质粒大小的那个地方开始就开始出现拖尾,一直拖到400bp(如果酶切正确,400bp是最小的一个片段).中间都看不到明显的条带.
请问怎么解决
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cdl007

木虫 (正式写手)


★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2011-01-20 19:41:05
30937747(金币+1): 2011-01-20 20:23:05
是不是酶切时间过久?可以尝试一下37℃一个小时?

无图无真相,
最好有三个孔,第一个酶单切,第二个酶单切,两个酶双切

理论上,前两个泳道都是一条条带,同样大小,双酶切的有两条
3楼2011-01-20 15:06:53
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poog502

木虫 (正式写手)



amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2011-01-20 19:40:59
30937747(金币+1): 2011-01-20 20:20:44
1\农杆菌的质粒很少的,你这样酶切看的见条带吗?
2、更换所用的器皿、水、buffer,之前也是切不开,换个之后重新酶切就好了。
2楼2011-01-20 14:55:05
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30937747

木虫 (小有名气)


...

引用回帖:
Originally posted by 30937747 at 2011-01-20 14:38:41:
我将一个质粒热转至E.coli中扩增后,用EcoRⅠ酶切鉴定正确.将鉴定正确的质粒电转至农杆菌,在抗性平板上筛选扩增后,提取出来的质粒用EcoRⅠ再次鉴定,却怎么也切不开,条带从质粒大小的那个地方开始就开始出现拖尾,一 ...

我想说.我是把一个质粒转到农杆菌里面去了.再把我转进去的提出来
4楼2011-01-20 20:21:30
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30937747

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by poog502 at 2011-01-20 14:55:05:
1\农杆菌的质粒很少的,你这样酶切看的见条带吗?
2、更换所用的器皿、水、buffer,之前也是切不开,换个之后重新酶切就好了。

额..我好像说错了.我本来就是单酶切,有五个位点
5楼2011-01-20 20:22:57
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