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moonblue789

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】请帮忙,扩增长片段基因遇到困难了

最近扩增一个基因碰到了困难,请大家帮帮忙,出出主意,集思广益。谢谢!
基因信息:长度3400bp,GC含量56%,退火温度(Oligo软件推荐):59.8度。
做过温度梯度(56度到62度),用过GC buffer,也改变镁离子浓度(2.5mM),用过某公司的Super Taq,也用过罗氏的扩增长片段的酶,都无能无力。
请各位帮忙了,谢谢!
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bigboy123

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-14 10:08:44
一般的Taq酶基本上都能满足这个要求,一般需要对你的PCR引物修改一下,提高特异性和扩增效率,通过换Taq酶起到作用一般不是特别显著。加入PCR增量剂有助于提高PCR产物的量,前提也是在使用普通Taq酶的情况下,现在许多Taq酶中加入的乱七八糟的东西太多。
8楼2011-01-14 09:16:57
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luzeyan

金虫 (小有名气)



moonblue789(金币+1):谢谢参与
moonblue789(金币+2):引物没换过,模板换过的。谢谢! 2011-01-12 19:49:25
引用回帖:
Originally posted by moonblue789 at 2011-01-12 19:10:19:
最近扩增一个基因碰到了困难,请大家帮帮忙,出出主意,集思广益。谢谢!
基因信息:长度3400bp,GC含量56%,退火温度(Oligo软件推荐):59.8度。
做过温度梯度(56度到62度),用过GC buffer,也改变镁离子 ...

1.引物有没有问题?
2.换一个模板做做
2楼2011-01-12 19:38:21
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bigboy123

铜虫 (小有名气)



moonblue789(金币+1):谢谢参与
moonblue789(金币+1):是扩增不出来! 2011-01-13 08:44:57
是量少呀还是不扩增呀?
3楼2011-01-12 20:07:56
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zgb1982

木虫 (正式写手)



moonblue789(金币+1):谢谢参与
是什么材料啊也没说。
4楼2011-01-12 20:23:46
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