应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 3946  |  回复: 37
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来

western 曝光actin正常，但是样品却曝不出来，样品整张膜都发光，我试过一抗的浓度从1:500到1:3000都是这种情况，封闭时间最长的时候封闭过夜，却还是整张膜都发光（一抗二抗都用TBST洗三遍每遍15分钟），请问各位是哪里出的问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-06 21:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-10 08:52:03:



你是怎么做一抗从1：500到1：3000的呢?是不是要做很多张膜啊？

每张膜上有几个样品呢?

请指教

是的我做了好多次，这些浓度都试过了，每张膜上刚开始是8个样，后来条件老不对，我怕浪费样品就每张膜上上了四个样了，
赞一下 回复此楼
14楼2011-01-10 11:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答

feng__

金虫 (著名写手)
★
huangwensh(金币+1): 2011-01-07 10:19:19
最爱花诗雨(金币+1):good 2011-01-07 10:23:09
是不是样品有问题，或者样品处理过程中有问题

再就是抗体了

一抗我们做一般都是1；400

二抗1；4000
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-07 10:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangwensh

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2011-01-07 10:05:27:
是不是样品有问题，或者样品处理过程中有问题

再就是抗体了

一抗我们做一般都是1；400

二抗1；4000

那我的actin曝出来都很正常，样品是不是不该有问题啊？
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-07 10:18:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2):good 2011-01-07 16:40:31
huangwensh(金币+3): 2011-01-07 16:58:42
引用回帖:
Originally posted by huangwensh at 2011-01-07 10:18:59:



那我的actin曝出来都很正常，样品是不是不该有问题啊？

恩，考虑下抗体的问题，再多做几次，有的时候是这样的，当时我跟同学在一块胶上跑样品，我的结果就很好，他的就出不来，后来再做就又出来了，也不知道到底是哪里出问题了，还有，你的样品是什么啊？细胞表达的蛋白吗？如果是的话，分清楚是胞外表达还是胞内，核内，如果是后者，那actin表达，你的样品不表达也是正常的，要破碎细胞壁，细胞核！呵呵，自己的一点小经验
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-07 10:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 38 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂求收留 +33 果然有我 2026-04-10 34/1700 2026-04-15 00:37 by zzzggc
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-04-14 6/300 2026-04-14 23:54 by Xurambo2014
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 材料085601调剂 +32 何润采123 2026-04-10 34/1700 2026-04-14 08:47 by 木木mumu～
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 293求调剂 +16 我爱高数高数爱� 2026-04-12 18/900 2026-04-13 21:47 by 学员JpLReM
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 0859，337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭