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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 学术讨论 » 【请教】量子点与抗体连接后，用SDS电泳确定连接时，量子点无法进入分离胶。。。
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校长大人

金虫 (小有名气)

[交流] 【请教】量子点与抗体连接后，用SDS电泳确定连接时，量子点无法进入分离胶。。。

请教大家谁做过这方面的实验，能够给些建议或意见的？
我试过的有：调节浓缩胶和分离胶的ph分别为6.8和8.8，加大电压150，延长电泳时间。。。最后紫外下观察还是不能进入
郁闷。。。求助~多谢了。。。
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1楼 2010-12-29 15:23:27
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ashui001

木虫 (著名写手)
★
nuaajsh(金币+1):鼓励交流 2011-01-01 21:24:05
校长大人(金币+4):谢谢！ 2011-01-04 09:10:12
量子点跑SDS-PAGE不太好跑，我跑的虽然能进去，但拖尾很严重
用琼脂糖胶跑的比较好，文献中大部分也是跑琼脂糖胶的
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2楼2010-12-30 10:10:24
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jeanne530

新虫 (初入文坛)
★
nuaajsh(金币+1):鼓励交流 2011-01-01 21:24:12
校长大人(金币+6):嗯 我试试看 太感谢了 2011-01-04 09:11:09
跑琼脂糖胶比较好吧 因为SDS胶中孔径比琼脂糖的要小 而且如果连接产物中团聚现象的话就更跑不出来了 建议你用1%的琼脂糖胶跑下试试 以光QD为参照  如果还跑不出来的话就说明团聚现象很严重了
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3楼2010-12-31 13:36:36
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jeanne530 at 2010-12-31 13:36:36:
跑琼脂糖胶比较好吧 因为SDS胶中孔径比琼脂糖的要小 而且如果连接产物中团聚现象的话就更跑不出来了 建议你用1%的琼脂糖胶跑下试试 以光QD为参照  如果还跑不出来的话就说明团聚现象很严重了

想请问一下，这种琼脂糖凝胶电泳，是跑平板电泳还是灌垂直胶电泳呢？水平或垂直有没有影响呢？使用的loading buffer 是sds-page电泳的buffer么？
多谢了~
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4楼2011-01-04 09:58:55
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jeanne530 at 2010-12-31 13:36:36:
跑琼脂糖胶比较好吧 因为SDS胶中孔径比琼脂糖的要小 而且如果连接产物中团聚现象的话就更跑不出来了 建议你用1%的琼脂糖胶跑下试试 以光QD为参照  如果还跑不出来的话就说明团聚现象很严重了

想请问一下，这种琼脂糖凝胶电泳，是跑平板电泳还是灌垂直胶电泳呢？水平或垂直有没有影响呢？使用的loading buffer 是sds-page电泳的buffer么？
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5楼2011-01-04 09:59:10
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chenyiping

铁虫 (小有名气)
建议跑个毛细管电泳
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6楼2011-03-01 20:57:04
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custardchen

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ashui001 at 2010-12-30 04:10:24:
量子点跑SDS-PAGE不太好跑，我跑的虽然能进去，但拖尾很严重
用琼脂糖胶跑的比较好，文献中大部分也是跑琼脂糖胶的

请问您跑琼脂糖胶的时候 用的Loading buffer  是什么啊
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7楼2011-03-02 09:32:38
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ashui001

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by custardchen at 2011-03-02 09:32:38:
请问您跑琼脂糖胶的时候 用的Loading buffer  是什么啊

用25%的甘油水溶液就好了
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8楼2011-03-02 10:15:14
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custardchen

金虫 (小有名气)
O(∩_∩)O~  谢谢啦
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9楼2011-03-02 10:18:33
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tntgascan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jeanne530 at 2010-12-31 13:36:36:
跑琼脂糖胶比较好吧 因为SDS胶中孔径比琼脂糖的要小 而且如果连接产物中团聚现象的话就更跑不出来了 建议你用1%的琼脂糖胶跑下试试 以光QD为参照  如果还跑不出来的话就说明团聚现象很严重了

请问团聚的话是什么现象？要怎么解决呢？
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10楼2011-03-05 10:16:25
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liuyufei3087

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by ashui001 at 2010-12-30 10:10:24:
量子点跑SDS-PAGE不太好跑，我跑的虽然能进去，但拖尾很严重
用琼脂糖胶跑的比较好，文献中大部分也是跑琼脂糖胶的

我想问一下，他跑的那个里还有蛋白质，如果琼脂糖跑完了，怎么回收样品呢？
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11楼2011-12-05 12:21:45
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crush_bc

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
找本本科分子生物学实验教材，很简单的~~蛋白质一般使用垂直SDS凝胶电泳，DNA采用琼脂糖呢，前者比后者的分离精度高（交联度大），对结合量子点的抗体采用垂直板SDS是可以的~~找本分子生物学实验教材看看
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12楼2011-12-30 14:17:43
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ashui001 at 2010-12-30 10:10:24:
量子点跑SDS-PAGE不太好跑，我跑的虽然能进去，但拖尾很严重
用琼脂糖胶跑的比较好，文献中大部分也是跑琼脂糖胶的

您好，我试了一下琼脂糖胶，拖尾很严重，没有形成条带的感觉，想向您讨教一下可能的原因，另外，团聚的问题在连接反应时是如何避免的？
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13楼2012-03-01 16:39:59
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jeanne530 at 2010-12-31 13:36:36:
跑琼脂糖胶比较好吧 因为SDS胶中孔径比琼脂糖的要小 而且如果连接产物中团聚现象的话就更跑不出来了 建议你用1%的琼脂糖胶跑下试试 以光QD为参照  如果还跑不出来的话就说明团聚现象很严重了

您好，我试了一下琼脂糖胶，拖尾很严重，没有形成条带的感觉，想向您讨教一下可能的原因，另外，团聚的问题在连接反应时是如何避免的？
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14楼2012-03-01 16:40:48
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chenyiping at 2011-03-01 20:57:04:
建议跑个毛细管电泳

之前也想过，但是老板坚持说SDS电泳比较直观。。。
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15楼2012-03-01 16:42:21
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ashui001

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 校长大人 at 2012-03-01 16:40:48:
您好，我试了一下琼脂糖胶，拖尾很严重，没有形成条带的感觉，想向您讨教一下可能的原因，另外，团聚的问题在连接反应时是如何避免的？

请问你的量子点是什么材料，尤其是表面性质，是自己做的还是买的？
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16楼2012-03-02 22:17:06
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校长大人

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by ashui001 at 2012-03-02 22:17:06:
请问你的量子点是什么材料，尤其是表面性质，是自己做的还是买的？

是买的 羧基化修饰的CdSe量子点 水溶性还是挺好的。和蛋白的连接反应是我自己做的 但是电泳一直不行。。。 试过很多种办法都不行  所以想请问一下做过的给些建议。
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17楼2012-03-06 16:01:38
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chenyiping

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
应该配一个胶的孔径大的作为分离胶，这样量子点容易进去
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18楼2012-03-06 16:20:10
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ashui001

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 校长大人 at 2012-03-06 16:01:38:
是买的 羧基化修饰的CdSe量子点 水溶性还是挺好的。和蛋白的连接反应是我自己做的 但是电泳一直不行。。。 试过很多种办法都不行  所以想请问一下做过的给些建议。

如果你用琼脂糖凝胶只跑量子点就有明显的拖尾，应该是量子点本省的质量问题，虽然水溶性比较好，不代表量子点的粒径分布均匀，或者没有团聚，建议你换一家量子点，或者用更低浓度的琼脂糖凝胶再跑下试试

偶联蛋白后有拖尾比较正常，要根据你偶联的蛋白分子量决定拖尾，以及你的偶联条件和电泳条件
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19楼2012-03-09 12:18:33
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whlnncrystal

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1956221楼: Originally posted by 校长大人 at 2012-03-01 16:40:48
您好，我试了一下琼脂糖胶，拖尾很严重，没有形成条带的感觉，想向您讨教一下可能的原因，另外，团聚的问题在连接反应时是如何避免的？...

我刚做完偶联，也同样跑得拖尾很严重，请问你后面这个问题解决了吗？
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20楼2012-06-18 11:32:26
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conanzzz

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
量子点使用前先10000转离心除去团聚,一般20纳米左右的量子点应该就不适合用PAGE胶来跑了,还是琼脂糖胶吧浓度也不要太高,0.5%-1%之间.另外如果QDs荧光挺强的上样量也不要太多~
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21楼2012-08-10 17:56:21
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