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校长大人

金虫 (小有名气)


[交流] 【请教】量子点与抗体连接后,用SDS电泳确定连接时,量子点无法进入分离胶。。。

请教大家谁做过这方面的实验,能够给些建议或意见的?
我试过的有:调节浓缩胶和分离胶的ph分别为6.8和8.8,加大电压150,延长电泳时间。。。最后紫外下观察还是不能进入
郁闷。。。求助~多谢了。。。
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ashui001

木虫 (著名写手)



nuaajsh(金币+1):鼓励交流 2011-01-01 21:24:05
校长大人(金币+4):谢谢! 2011-01-04 09:10:12
量子点跑SDS-PAGE不太好跑,我跑的虽然能进去,但拖尾很严重
用琼脂糖胶跑的比较好,文献中大部分也是跑琼脂糖胶的
2楼2010-12-30 10:10:24
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ashui001

木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by custardchen at 2011-03-02 09:32:38:
请问您跑琼脂糖胶的时候 用的Loading buffer  是什么啊

用25%的甘油水溶液就好了
8楼2011-03-02 10:15:14
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ashui001

木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by 校长大人 at 2012-03-01 16:40:48:
您好,我试了一下琼脂糖胶,拖尾很严重,没有形成条带的感觉,想向您讨教一下可能的原因,另外,团聚的问题在连接反应时是如何避免的?

请问你的量子点是什么材料,尤其是表面性质,是自己做的还是买的?
16楼2012-03-02 22:17:06
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ashui001

木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by 校长大人 at 2012-03-06 16:01:38:
是买的 羧基化修饰的CdSe量子点 水溶性还是挺好的。和蛋白的连接反应是我自己做的 但是电泳一直不行。。。 试过很多种办法都不行  所以想请问一下做过的给些建议。

如果你用琼脂糖凝胶只跑量子点就有明显的拖尾,应该是量子点本省的质量问题,虽然水溶性比较好,不代表量子点的粒径分布均匀,或者没有团聚,建议你换一家量子点,或者用更低浓度的琼脂糖凝胶再跑下试试

偶联蛋白后有拖尾比较正常,要根据你偶联的蛋白分子量决定拖尾,以及你的偶联条件和电泳条件
19楼2012-03-09 12:18:33
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