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lianyi1989

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr求助

最近刚刚做荧光定量,但是结果总是不好,有一点就是老达不到平台期,已经40个循环了,模板量已经加到2ul(20ul体系),但还是不行,不知道是为什么,达不到平台期出来模板量低不知道还有没有其他原因?请各位能帮忙分析下,谢了!
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lianyi1989

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by lovenlong at 2010-12-27 14:36:22:
1.楼主的体系用的模板量是多少?各个反应管是否一致?按照标准的PCR体系来配,同时结合你用的试剂说明书来配体系,一般不会有太大问题。我做的10微升的体系一般10~30ng的模板就够了。
2.达不到平台期,有时候很难 ...

谢谢~我体系基本是按试剂说明书来配的,就是加大了模板的量而已,退火温度我是做普通pcr提前摸好的,感觉问题应该不大,上面有同学说可能是模板质量有问题,我现在就在怀疑是不是真是我模板质量的问题...据你做的经验,有没有可能是这种原因呢?
9楼2010-12-28 11:11:02
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love_st

金虫 (著名写手)


lianyi1989(金币+1): 2010-12-23 19:33:35
上图呗,还有,为什么非得到平台,只要有平台的趋势就可以了
2楼2010-12-23 16:52:56
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在雨中

金虫 (著名写手)



rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-23 18:54:35
lianyi1989(金币+1): 2010-12-23 19:33:40
我曾经碰到过类似的问题。
如果你的模板没有问题的话,是不是可以考虑下你的PCR mix的质量。
3楼2010-12-23 18:28:23
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lianyi1989

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-23 16:52:56:
上图呗,还有,为什么非得到平台,只要有平台的趋势就可以了

就是到最后指数期还没完呢~这结果肯定没法用啊
4楼2010-12-23 19:33:25
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简单回复
2010-12-23 21:04   回复  
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