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lianyi1989

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[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr求助

最近刚刚做荧光定量，但是结果总是不好，有一点就是老达不到平台期，已经40个循环了，模板量已经加到2ul(20ul体系)，但还是不行，不知道是为什么，达不到平台期出来模板量低不知道还有没有其他原因？请各位能帮忙分析下，谢了！

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1楼 2010-12-23 14:58:18

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lianyi1989

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引用回帖:

Originally posted by lovenlong at 2010-12-27 14:36:22:
1.楼主的体系用的模板量是多少？各个反应管是否一致?按照标准的PCR体系来配，同时结合你用的试剂说明书来配体系，一般不会有太大问题。我做的10微升的体系一般10~30ng的模板就够了。
2.达不到平台期，有时候很难 ...

谢谢~我体系基本是按试剂说明书来配的，就是加大了模板的量而已，退火温度我是做普通pcr提前摸好的，感觉问题应该不大，上面有同学说可能是模板质量有问题，我现在就在怀疑是不是真是我模板质量的问题...据你做的经验，有没有可能是这种原因呢？