应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序问题：PCR产物未纯化测序会怎样？
51/1返回列表
查看: 4104  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】测序问题：PCR产物未纯化测序会怎样？ 已有7人参与

之前送了一些PCR未纯化产物去公司测序，不知道是不是忘了标明，在收费单上显示是纯化产物测序，看了下大部分图谱都很正常，不知道是公司弄错了，还是确实影响不大。少数有不大严重套峰的情况如下图，基本也能判读，弄不清是产物条带不单一还是未纯化引起的，麻烦大家帮看看。

[ Last edited by lhm_hnyj on 2010-12-20 at 11:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-20 11:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2010-12-20 15:41:11
PCR产物最好电泳检测一下，如果有非特异带就一定要切胶之后再测
即使没有非特异带，也可能有非特异扩增产物，量很少，胶上看不出来，但是测序的时候有可能被作为模板得到扩增，最后色谱图上就有套峰，影响序列的判读
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-12-20 14:51:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-20 15:40:57
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-12-20 11:52:07:
之前送了一些PCR未纯化产物去公司测序，不知道是不是忘了标明，在收费单上显示是纯化产物测序，看了下大部分图谱都很正常，不知道是公司弄错了，还是确实影响不大。少数有不大严重套峰的情况如下图，基本也能判读 ...

其实对于一般克隆来说，PCR产物测序是可以的，然后看看同源性。但是如果对测序结果很严格，比如做点突变，那就需要用高保真Taq酶扩增，然后连T载体后测序，这样测得结果比单纯PCR产物要准确很多！
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-20 11:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by guoxingjun2008 at 2010-12-20 11:55:06:



其实对于一般克隆来说，PCR产物测序是可以的，然后看看同源性。但是如果对测序结果很严格，比如做点突变，那就需要用高保真Taq酶扩增，然后连T载体后测序，这样测得结果比单纯PCR产物要准确很多！

哦，您的意思我明白了。这里我是不大清楚PCR产物未经过纯化直接测序会有什么后果，峰图上有什么表现？
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-20 12:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-20 17:51:31
一般纯化以后测比较准确！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2010-12-20 16:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭