24小时热门版块排行榜    

查看: 3210  |  回复: 17

tanqian124

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】免疫荧光的问题 。。

我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验,二抗用的是FITC标记的,然后用荧光显微镜观察,用的蓝色通道,为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢,我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区,然后换成40X的定位视野,然后把常光关掉,调到蓝色通道,为什么看不到呢?是不是还要调节什么呢。。

请大家指教一下 很急啊。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):GOOD 2010-12-19 10:14:43
tanqian124(金币+1): 2010-12-19 13:59:29
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的,要严格避光,有必要的话还得加抗淬灭剂
2楼2010-12-19 10:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanqian124

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 10:04:53:
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的,要严格避光,有必要的话还得加抗淬灭剂

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它
3楼2010-12-19 13:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhd997(金币+1):有道理 2010-12-19 15:52:08
tanqian124(金币+1): 2010-12-20 22:15:12
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:10
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 13:59:22:

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它

哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题,以及是不是你方法学的问题
4楼2010-12-19 15:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanqian124

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 15:24:17:


哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题,以及是不是你方法学的问题

我看的是5——HT3B受体的表达 可能是这个3B的问题吧 因为他们做PCRwestern 都不是很好出结果。。。我再试试吧
5楼2010-12-20 22:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tanqian124(金币+1):谢谢参与
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:16
淬灭没那么快,但是,我想是不是你们操作有问题,应该用FITC的绿光快或者GFP的滤光块吧。
6楼2010-12-20 22:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhfb619ncu

金虫 (小有名气)



tanqian124(金币+1):谢谢参与
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:26
我想除了操作的问题外,会不会你用的FITC过期了,或者是受污染了,导致视线模糊呢
7楼2010-12-22 12:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjp85

新虫 (初入文坛)


求助:在体荧光检测老鼠肿瘤,是检测哪些指标


tanqian124(金币+1):谢谢参与
实验中要用活体荧光成像技术来检测肿瘤,请各位指教有哪些指标可以做为检测的依据?
8楼2010-12-22 16:13:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lw582482481

铜虫 (初入文坛)



tanqian124(金币+1):谢谢参与
焦距对吗
10楼2011-06-29 19:46:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luoyubin

铜虫 (初入文坛)



tanqian124(金币+1):谢谢参与
确保抗体没问题,选择的激发光正确的前提下,试试提高曝光强度,和提高抗体浓度!
11楼2011-06-30 06:35:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixinling

金虫 (正式写手)



tanqian124(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 09:30:47:
我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验,二抗用的是FITC标记的,然后用荧光显微镜观察,用的蓝色通道,为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢,我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区,然后换 ...

在楼上各兄弟基础上再补充一点,荧光弱有的时候是自己眼睛的原因,把实验室其他光源都关掉,这样瞳孔能大点儿,有时候就能看到了,另外如果是外接了电脑的显微镜,把档打到目镜,减少分光,也能有不错的改观。
12楼2011-06-30 08:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happy小屁

新虫 (初入文坛)



tanqian124(金币+1):谢谢参与
我想问下,那个抗荧光淬灭封片剂从4度拿出来滴一滴  太粘稠了,可不可以少水浴一会啊?各位大虾都是怎么处理的啊。谢谢~~
13楼2011-12-29 16:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xueaiw

铁虫 (小有名气)



tanqian124(金币+1): 谢谢参与
解决了吗?
16楼2012-05-08 16:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

废哥117

银虫 (小有名气)



tanqian124(金币+1): 谢谢参与
在10X视野中找到目标后直接调到40X后焦距有可能不对,所以你要再调一下,另外也有可能是你的FITC不行,做阳性对照看看
17楼2012-05-30 13:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

springCCC

新虫 (初入文坛)



tanqian124(金币+1): 谢谢参与
你确定目镜开了吗??
18楼2015-02-11 21:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
6931375469楼
2011-06-25 15:13   回复  
tanqian124(金币+1):谢谢参与
foxmygod14楼
2012-04-24 21:38   回复  
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
2012-05-03 15:15   回复  
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 tanqian124 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
信息提示
请填处理意见