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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】免疫荧光的问题 。。
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tanqian124

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】免疫荧光的问题 。。

我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验，二抗用的是FITC标记的，然后用荧光显微镜观察，用的蓝色通道，为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢，我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区，然后换成40X的定位视野，然后把常光关掉，调到蓝色通道，为什么看不到呢？是不是还要调节什么呢。。

请大家指教一下 很急啊。。。
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1楼 2010-12-19 09:30:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):GOOD 2010-12-19 10:14:43
tanqian124(金币+1): 2010-12-19 13:59:29
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的，要严格避光，有必要的话还得加抗淬灭剂
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2楼2010-12-19 10:04:53
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tanqian124

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 10:04:53:
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的，要严格避光，有必要的话还得加抗淬灭剂

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它
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3楼2010-12-19 13:59:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):有道理 2010-12-19 15:52:08
tanqian124(金币+1): 2010-12-20 22:15:12
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:10
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 13:59:22:

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它

哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题，以及是不是你方法学的问题
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4楼2010-12-19 15:24:17
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tanqian124

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 15:24:17:


哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题，以及是不是你方法学的问题

我看的是5——HT3B受体的表达 可能是这个3B的问题吧 因为他们做PCRwestern 都不是很好出结果。。。我再试试吧
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5楼2010-12-20 22:16:28
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yuanzhiqin.119

至尊木虫 (著名写手)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:16
淬灭没那么快，但是，我想是不是你们操作有问题，应该用FITC的绿光快或者GFP的滤光块吧。
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6楼2010-12-20 22:41:32
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zhfb619ncu

金虫 (小有名气)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:26
我想除了操作的问题外，会不会你用的FITC过期了，或者是受污染了，导致视线模糊呢
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7楼2010-12-22 12:47:12
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zjp85

新虫 (初入文坛)

求助：在体荧光检测老鼠肿瘤，是检测哪些指标

★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
实验中要用活体荧光成像技术来检测肿瘤，请各位指教有哪些指标可以做为检测的依据?
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8楼2010-12-22 16:13:12
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lw582482481

铜虫 (初入文坛)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
焦距对吗
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10楼2011-06-29 19:46:36
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luoyubin

铜虫 (初入文坛)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
确保抗体没问题，选择的激发光正确的前提下，试试提高曝光强度，和提高抗体浓度！
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11楼2011-06-30 06:35:25
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yixinling

金虫 (正式写手)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 09:30:47:
我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验，二抗用的是FITC标记的，然后用荧光显微镜观察，用的蓝色通道，为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢，我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区，然后换 ...

在楼上各兄弟基础上再补充一点，荧光弱有的时候是自己眼睛的原因，把实验室其他光源都关掉，这样瞳孔能大点儿，有时候就能看到了，另外如果是外接了电脑的显微镜，把档打到目镜，减少分光，也能有不错的改观。
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12楼2011-06-30 08:36:04
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happy小屁

新虫 (初入文坛)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
我想问下，那个抗荧光淬灭封片剂从4度拿出来滴一滴  太粘稠了，可不可以少水浴一会啊？各位大虾都是怎么处理的啊。谢谢~~
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13楼2011-12-29 16:16:01
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xueaiw

铁虫 (小有名气)
★
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
解决了吗？
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16楼2012-05-08 16:19:34
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废哥117

银虫 (小有名气)
★
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
在10X视野中找到目标后直接调到40X后焦距有可能不对，所以你要再调一下，另外也有可能是你的FITC不行，做阳性对照看看
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17楼2012-05-30 13:41:51
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springCCC

新虫 (初入文坛)
★
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
你确定目镜开了吗？？
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18楼2015-02-11 21:35:11
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6931375469楼
2011-06-25 15:13   回复  
tanqian124(金币+1):谢谢参与
foxmygod14楼
2012-04-24 21:38   回复  
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
zhaoweigang15楼
2012-05-03 15:15   回复  
tanqian124(金币+1): 谢谢参与
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