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【求助/交流】免疫荧光的问题 。。
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tanqian124
铜虫
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虫号: 854494
[交流]
【求助/交流】免疫荧光的问题 。。
我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验,二抗用的是FITC标记的,然后用荧光显微镜观察,用的蓝色通道,为什么视野中一片漆黑啊。。。
是不是显微镜操作的问题呢,我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区,然后换成40X的定位视野,然后把常光关掉,调到蓝色通道,为什么看不到呢?是不是还要调节什么呢。。
请大家指教一下 很急啊。。。
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1楼
2010-12-19 09:30:47
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yixinling
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tanqian124(金币
+1
):谢谢参与
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Originally posted by
tanqian124
at 2010-12-19 09:30:47:
我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验,二抗用的是FITC标记的,然后用荧光显微镜观察,用的蓝色通道,为什么视野中一片漆黑啊。。。
是不是显微镜操作的问题呢,我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区,然后换 ...
在楼上各兄弟基础上再补充一点,荧光弱有的时候是自己眼睛的原因,把实验室其他光源都关掉,这样瞳孔能大点儿,有时候就能看到了,另外如果是外接了电脑的显微镜,把档打到目镜,减少分光,也能有不错的改观。
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12楼
2011-06-30 08:36:04
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三磷酸腺苷
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tanqian124(金币
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):谢谢参与
dhd997(金币+1):GOOD 2010-12-19 10:14:43
tanqian124(金币+1): 2010-12-19 13:59:29
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的,要严格避光,有必要的话还得加抗淬灭剂
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2楼
2010-12-19 10:04:53
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tanqian124
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Originally posted by
三磷酸腺苷
at 2010-12-19 10:04:53:
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的,要严格避光,有必要的话还得加抗淬灭剂
恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它
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3楼
2010-12-19 13:59:22
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三磷酸腺苷
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dhd997(金币+1):有道理 2010-12-19 15:52:08
tanqian124(金币+1): 2010-12-20 22:15:12
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:10
引用回帖:
Originally posted by
tanqian124
at 2010-12-19 13:59:22:
恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它
哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题,以及是不是你方法学的问题
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4楼
2010-12-19 15:24:17
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