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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】免疫荧光的问题 。。
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tanqian124

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】免疫荧光的问题 。。

我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验，二抗用的是FITC标记的，然后用荧光显微镜观察，用的蓝色通道，为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢，我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区，然后换成40X的定位视野，然后把常光关掉，调到蓝色通道，为什么看不到呢？是不是还要调节什么呢。。

请大家指教一下 很急啊。。。
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1楼 2010-12-19 09:30:47
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yixinling

金虫 (正式写手)
★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 09:30:47:
我做的是脑组织中受体蛋白的定性试验，二抗用的是FITC标记的，然后用荧光显微镜观察，用的蓝色通道，为什么视野中一片漆黑啊。。。

是不是显微镜操作的问题呢，我是现先在常光下用10X找到我需要的脑区，然后换 ...

在楼上各兄弟基础上再补充一点，荧光弱有的时候是自己眼睛的原因，把实验室其他光源都关掉，这样瞳孔能大点儿，有时候就能看到了，另外如果是外接了电脑的显微镜，把档打到目镜，减少分光，也能有不错的改观。
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12楼2011-06-30 08:36:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
tanqian124(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):GOOD 2010-12-19 10:14:43
tanqian124(金币+1): 2010-12-19 13:59:29
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的，要严格避光，有必要的话还得加抗淬灭剂
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2楼2010-12-19 10:04:53
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tanqian124

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 10:04:53:
FITC不是黄绿色的么……
另外FITC淬灭很快的，要严格避光，有必要的话还得加抗淬灭剂

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它
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3楼2010-12-19 13:59:22
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):有道理 2010-12-19 15:52:08
tanqian124(金币+1): 2010-12-20 22:15:12
tanqian124(金币+1): 2011-01-14 15:21:10
引用回帖:
Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 13:59:22:

恩 对它发出的光是绿色的 但是 要用蓝色光道激发它

哦哦~可能不同显微镜标识的不一样
另外我觉得你可以做个阳性对照
看看是不是抗体本身的问题，以及是不是你方法学的问题
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4楼2010-12-19 15:24:17
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