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hlznd02

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】电泳分离胶pH的问题 已有6人参与

跑电泳时分离胶的Tris-HCl的pH不到8.8对结果有什么影响吗?原理是什么?急。。。谢谢!
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

影响不大吧
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-12-11 23:29:37
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道是低多少?低一点的话,影响应该不是很大,但是,差的太多,会影响蛋白条带的分离效果。

至于原理嘛,
SDS-PAGE制胶用的Tris-HCL缓冲液,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.8。电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲液。
当样品从浓缩胶进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
3楼2010-12-12 00:25:04
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2009227004

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上层胶pH6.8时,氯离子完全解离,在电场中移动最快,而电泳槽中的甘氨酸此时只有少量解离,在电场中移动慢,蛋白质在一快一慢过程中被浓缩了。而下层胶pH8.8时,甘氨酸解离度增大,泳动速度超过了蛋白质,大小形状不同的蛋白质在SDS以及不同电场 力的作用下得到分离!!!
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
4楼2010-12-12 01:39:17
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
3楼4楼解释的很好,PH偏离大的话肯定有影响吧..
5楼2010-12-12 11:15:53
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hlznd02

金虫 (初入文坛)

谢谢楼上几位,我测量一下,我的分离胶pH大概在8.2只有,蛋白就会跑得靠近溴酚蓝的带,请问应该怎么解释这个现象?如果用pH8.8跑的话做下面的蛋白就会离溴酚蓝一段距离。胶的长度应该都是差不多的。而且是pH8.8的胶跑的最快,8.2的话就会跑的慢
6楼2010-12-14 23:15:21
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diankuangji

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
若是浓缩胶与分离胶的pH都为6.8,好像分子量小的点就要出不来了,就是比正常分离胶pH为8.8的在胶图的底部少很多点!
7楼2011-06-29 15:46:03
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