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hlznd02

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[交流] 【求助/交流】电泳分离胶pH的问题已有6人参与

跑电泳时分离胶的Tris-HCl的pH不到8.8对结果有什么影响吗？原理是什么？急。。。谢谢！

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1楼 2010-12-11 22:43:05

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diankuangji

新虫 (初入文坛)

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若是浓缩胶与分离胶的pH都为6.8,好像分子量小的点就要出不来了,就是比正常分离胶pH为8.8的在胶图的底部少很多点!

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7楼2011-06-29 15:46:03

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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

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不知道是低多少？低一点的话，影响应该不是很大，但是，差的太多，会影响蛋白条带的分离效果。

至于原理嘛，
SDS-PAGE制胶用的Tris-HCL缓冲液，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.8。电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲液。
当样品从浓缩胶进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。

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