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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】电泳分离胶pH的问题
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hlznd02

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】电泳分离胶pH的问题 已有6人参与

跑电泳时分离胶的Tris-HCl的pH不到8.8对结果有什么影响吗？原理是什么？急。。。谢谢！
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1楼 2010-12-11 22:43:05
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hlznd02

金虫 (初入文坛)
谢谢楼上几位，我测量一下，我的分离胶pH大概在8.2只有，蛋白就会跑得靠近溴酚蓝的带，请问应该怎么解释这个现象？如果用pH8.8跑的话做下面的蛋白就会离溴酚蓝一段距离。胶的长度应该都是差不多的。而且是pH8.8的胶跑的最快，8.2的话就会跑的慢
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6楼2010-12-14 23:15:21
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道是低多少？低一点的话，影响应该不是很大，但是，差的太多，会影响蛋白条带的分离效果。

至于原理嘛，
SDS-PAGE制胶用的Tris-HCL缓冲液，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.8。电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲液。
当样品从浓缩胶进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
3楼2010-12-12 00:25:04
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2009227004

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上层胶pH6.8时，氯离子完全解离，在电场中移动最快，而电泳槽中的甘氨酸此时只有少量解离，在电场中移动慢，蛋白质在一快一慢过程中被浓缩了。而下层胶pH8.8时，甘氨酸解离度增大，泳动速度超过了蛋白质，大小形状不同的蛋白质在SDS以及不同电场 力的作用下得到分离！！！
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当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
4楼2010-12-12 01:39:17
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
3楼4楼解释的很好，PH偏离大的话肯定有影响吧..
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5楼2010-12-12 11:15:53
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