| 查看: 676 | 回复: 1 | |||
[交流]
【求助/交流】【求助】In-Fusion® Advantage PCR Cloning Kit克隆 已有1人参与
|
|
大家好，我现在做用In-Fusion® Advantage PCR Cloning Kit克隆，很头疼，怎么都长不出来啊，纠结啊，大侠们帮帮忙啊！！！我的insert和vector由于在需要的地方都没有酶切位点，所以用是用pcr方法扩增出来的，然后用dpnⅠ37度一小时切除模板，再跑胶回收。插入片段较大，有5.5k，载体是6.4k。按说明书上的2：1比例混合的话，插入片段就得用350ng左右，但说明书上又建议最好不超过200ng,我用的是2：1的比例，10微升的体系，37度15分钟再50度15分钟，接下来都是按说明书上的做的，positive control长出菌落了，就我那个长不出来，不知道什么原因，我是不是应该把比例调到3：1,那样的话insert就得用500ng左右了，会不会太多，另外，我是不是应该延长一下37度和50度孵育的时间，以及做完转化后是不是得先用无抗的LB或SOC培养基复苏一下再涂板？ 我的邮箱是jlulin@yeah.net，希望哪位高手能指点一下！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有155人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 微卫星标记开发过程送测序的阳性克隆如何
已经有4人回复
- 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
已经有13人回复
- 急求RT-PCR电泳图分析
已经有22人回复
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 分子生物学PCR
已经有81人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 重叠PCR克隆大片段
已经有4人回复
- pcr，RACE,低表达量基因的克隆
已经有8人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR产物克隆
已经有8人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现CK
已经有4人回复
- 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】进行pcr克隆时，出现拖尾现象
已经有6人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
shizishanshang
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 72 (初中生)
- 金币: 10570.4
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 3882
- 在线: 1215.1小时
- 虫号: 297159
- 注册: 2006-11-18
- 性别: GG
- 专业: 植物学
2楼2011-04-16 23:49:26
