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neversaydi

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于western 求助，高手请帮帮忙 已有8人参与

我想跑185kd的蛋白。
想问一下，这样的话，
1.浓缩胶和分离胶应该各用多少浓度的啊？
2.转膜和电泳的时候应该怎么个条件啊。
因为第一次做，所有求教一下，请各位大师大侠不吝赐教，小女子在这里叩谢啦
谢谢
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neverdaydie!
1楼 2010-12-07 12:45:11
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bingdong05 at 2010-12-07 16:31:46:
185kd，8%的胶应该可以，上层胶一般都是3%的，另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定

一般跑60KD左右，是电泳80V  2h左右，转膜300MA  90min。
那这样的话，180KD应该是怎么个条件呢？谢谢大师指点
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neverdaydie!
3楼2010-12-07 18:47:01
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangleisdnu at 2010-12-08 04:47:11:
如果你有预染的蛋白marker的话，可以通过蛋白marker来确定，
如果没有的话100V 2 hours 应该可以，转膜时间最好长一点semi-dry可以2-3hours

我一般都是湿转。
如果按照60 KD，我是80V 2H，转膜300mA 90min 的话，
  180KD大概是个什么条件呢？谢谢
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neverdaydie!
5楼2010-12-08 10:33:22
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wenjunlin at 2010-12-12 16:23:13:
我觉得，转膜300mA 90min足够了，你可以先试做一下。。。

我的是90KD左右，350mA，100V转膜1h，效果还是不错的。。。。

电泳配胶，你可以查下一些文献，应该都有的

300mA  90min  是60KD蛋白的转膜条件。这个我知道。我是想问180KD是个什么条件。大侠，辛苦下，再指教下。。。呵呵 谢谢
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neverdaydie!
8楼2010-12-13 08:41:36
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuaisuo1984 at 2010-12-14 11:01:13:
我们一般180KD的转膜是40v，3h，湿转，都能出来。希望对你有帮助~~~

恩  谢谢   电泳条件呢？也是80V ？多长时间呢？
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neverdaydie!
11楼2010-12-14 14:09:37
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neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shagrace at 2010-12-18 14:06:56:
我做的都是100V，1H，200mA，不管多大分子量，都出来了

那你们配的胶呢？
我们actin的条件差不多是 10% 5% 的胶
80V到红带出来，转成120V，一直到样品跑到底。
  如果分子量180kd的话，  你的这个条件，电泳能出来，那胶的浓度是多少？
跟楼上一样？ 转膜呢？
谢谢  回答。  我主要还是很菜，，，呵呵
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neverdaydie!
14楼2010-12-21 08:50:35
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