应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于western 求助，高手请帮帮忙
51/1返回列表
查看: 1223  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于western 求助，高手请帮帮忙 已有8人参与

我想跑185kd的蛋白。
想问一下，这样的话，
1.浓缩胶和分离胶应该各用多少浓度的啊？
2.转膜和电泳的时候应该怎么个条件啊。
因为第一次做，所有求教一下，请各位大师大侠不吝赐教，小女子在这里叩谢啦
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
neverdaydie!
1楼 2010-12-07 12:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wenjunlin at 2010-12-12 16:23:13:
我觉得，转膜300mA 90min足够了，你可以先试做一下。。。

我的是90KD左右，350mA，100V转膜1h，效果还是不错的。。。。

电泳配胶，你可以查下一些文献，应该都有的

300mA  90min  是60KD蛋白的转膜条件。这个我知道。我是想问180KD是个什么条件。大侠，辛苦下，再指教下。。。呵呵 谢谢
赞一下 回复此楼
neverdaydie!
8楼2010-12-13 08:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

bingdong05

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-09 11:54:28
185kd，8%的胶应该可以，上层胶一般都是3%的，另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-07 16:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bingdong05 at 2010-12-07 16:31:46:
185kd，8%的胶应该可以，上层胶一般都是3%的，另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定

一般跑60KD左右，是电泳80V  2h左右，转膜300MA  90min。
那这样的话，180KD应该是怎么个条件呢？谢谢大师指点
赞一下 回复此楼
neverdaydie!
3楼2010-12-07 18:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:54:37
如果你有预染的蛋白marker的话，可以通过蛋白marker来确定，
如果没有的话100V 2 hours 应该可以，转膜时间最好长一点semi-dry可以2-3hours
赞一下(2人) 回复此楼
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
4楼2010-12-08 04:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭