应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于western 求助，高手请帮帮忙
51/1返回列表
查看: 1562  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于western 求助，高手请帮帮忙 已有8人参与

我想跑185kd的蛋白。
想问一下，这样的话，
1.浓缩胶和分离胶应该各用多少浓度的啊？
2.转膜和电泳的时候应该怎么个条件啊。
因为第一次做，所有求教一下，请各位大师大侠不吝赐教，小女子在这里叩谢啦
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
neverdaydie!
1楼 2010-12-07 12:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wenjunlin at 2010-12-12 16:23:13:
我觉得，转膜300mA 90min足够了，你可以先试做一下。。。

我的是90KD左右，350mA，100V转膜1h，效果还是不错的。。。。

电泳配胶，你可以查下一些文献，应该都有的

300mA  90min  是60KD蛋白的转膜条件。这个我知道。我是想问180KD是个什么条件。大侠，辛苦下，再指教下。。。呵呵 谢谢
赞一下 回复此楼
neverdaydie!
8楼2010-12-13 08:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

bingdong05

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-09 11:54:28
185kd，8%的胶应该可以，上层胶一般都是3%的，另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-07 16:31:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neversaydi

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bingdong05 at 2010-12-07 16:31:46:
185kd，8%的胶应该可以，上层胶一般都是3%的，另外条件要根据你的膜以及转膜仪器来定

一般跑60KD左右，是电泳80V  2h左右，转膜300MA  90min。
那这样的话，180KD应该是怎么个条件呢？谢谢大师指点
赞一下 回复此楼
neverdaydie!
3楼2010-12-07 18:47:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 11:54:37
如果你有预染的蛋白marker的话，可以通过蛋白marker来确定，
如果没有的话100V 2 hours 应该可以，转膜时间最好长一点semi-dry可以2-3hours
赞一下(2人) 回复此楼
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
4楼2010-12-08 04:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +8 ziyangfang 2026-08-25 11/550 2026-09-01 09:51 by zzuzxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭