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youth1314

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】关于酶切位点前添加保护碱基 已有3人参与

本人设计了一对引物,正向引物GC含量47.8%,5'端加酶切位点Bgl2;反向引物GC含量为38.1%,3'端添加酶切位点BstE2。本人想在酶切位点上添加保护碱基,加什么碱基比较合适,请各位高手赐教。谢谢!
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happyeveryday!
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-06 23:35:58
推荐
Bgl II    GGAAGATCTTCC
BstE II         G GGT(A/T)ACC C
如果直接PCR产物直接酶切做连接的话我觉得BstE II 的保护碱基换成ACTG

[ Last edited by susizheng on 2010-12-6 at 23:18 ]
Thank-you,so-blue.
3楼2010-12-06 23:16:15
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youth1314

木虫 (职业作家)

更正一下

本人设计了一对引物,正向引物GC含量47.8%,5'端加酶切位点Bgl2;反向引物GC含量为38.1%,5'端添加酶切位点BstE2。本人想在酶切位点上添加保护碱基,加什么碱基比较合适,请各位高手赐教。谢谢!

[ Last edited by youth1314 on 2010-12-6 at 22:41 ]
happyeveryday!
2楼2010-12-06 22:36:28
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-06 23:35:43
http://www.cnbiotech.com/html/dna/20071014/2509.html

呵呵,看看上面这个链接吧。

顺便说一下,你选择的这个BstE2酶效率很低,加上保护碱基后20hrs才能切10%。可以考虑换别的效率高的酶 EcoR I   BamH I   Nhe I  等等。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-12-06 23:16:17
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