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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酶切位点前添加保护碱基
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youth1314

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】关于酶切位点前添加保护碱基 已有3人参与

本人设计了一对引物，正向引物GC含量47.8%，5'端加酶切位点Bgl2；反向引物GC含量为38.1%，3'端添加酶切位点BstE2。本人想在酶切位点上添加保护碱基，加什么碱基比较合适，请各位高手赐教。谢谢！
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happyeveryday!
1楼 2010-12-06 22:35:09
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youth1314

木虫 (职业作家)

更正一下

本人设计了一对引物，正向引物GC含量47.8%，5'端加酶切位点Bgl2；反向引物GC含量为38.1%，5'端添加酶切位点BstE2。本人想在酶切位点上添加保护碱基，加什么碱基比较合适，请各位高手赐教。谢谢！

[ Last edited by youth1314 on 2010-12-6 at 22:41 ]
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happyeveryday!
2楼2010-12-06 22:36:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-06 23:35:58
推荐
Bgl II    GGAAGATCTTCC
BstE II         G GGT(A/T)ACC C
如果直接PCR产物直接酶切做连接的话我觉得BstE II 的保护碱基换成ACTG

[ Last edited by susizheng on 2010-12-6 at 23:18 ]
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Thank-you，so-blue.
3楼2010-12-06 23:16:15
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-06 23:35:43
http://www.cnbiotech.com/html/dna/20071014/2509.html

呵呵，看看上面这个链接吧。

顺便说一下，你选择的这个BstE2酶效率很低，加上保护碱基后20hrs才能切10%。可以考虑换别的效率高的酶 EcoR I   BamH I   Nhe I  等等。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-12-06 23:16:17
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