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piaopiao233

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】有关HIS-tag蛋白质纯化

现在在做蛋白质纯化实验
用到novagen 的his-bind kits
其中用的是镍柱
一个小试剂盒天价,但是头疼的是没有说明书
老师给了一个类似的,全英文的,要二三十页
头大啊


不知道有没有做过这个实验的大侠们,指导一二啊
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boouy

银虫 (正式写手)


正好提高一下英文。
3楼2010-11-15 13:38:58
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墨香若水

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-11-15 13:12:20
lstt09nk(金币+2):感谢交流 2010-11-15 13:16:06
1 lysis buffer先平衡柱子 (~10ml) 2 酶液过柱子(流下来的叫初回,也要收集,防止蛋白吸附太少,最后得率不高的话再过一次) 3washbuffer 洗  洗到OD280为0(杂蛋白全部洗掉)4elution buffer洗(3ml内,洗到OD280为0,收集的就是所要蛋白)
2楼2010-11-15 13:03:35
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xhjggl

木虫 (正式写手)


上海生工有便宜的 021-37772436

Ni-NTA SefinoseTM 6 Fast Flow       
产品特性:
(1) 与三价金属离子螯合剂亚氨基二乙酸制成的Ni-IDA-琼脂糖相比,Ni-NTA-琼脂糖的非特异性吸附明显减少,可让使用者获得更高纯度的目标蛋白
(2) 与三价金属离子螯合剂亚氨基二乙酸制成的Ni-IDA-琼脂糖相比,Ni-NTA-琼脂糖的非特异性吸附明显减少,可让使用者获得更高纯度的目标蛋白
(3) 支持变性包涵体蛋白的柱上复性,起到分离、复性同时进行的效果
(4) 可耐受溶液中更高浓度的还原试剂(β巯基乙醇最高可用到20mM)。
(5) 琼脂糖基质在pH 3-12的范围内保持稳定,可以耐受反复的在位清洗(CIP)。
(6) 纯化过程中极少的Ni渗漏
(7) 可以反复使用和再生5-10次. 基质: 带有Ni2+ 高度交联的6%琼脂糖; 平均颗粒大小: 90um; 动态结合载量: Breakthrough capacity at 10%,  150 cm/h:大约40 mg histidine-tagged 蛋白质/ml 填料; 金属离子载量: 大约 15 µmol Ni2+/ml 填料; 化学稳定性: 40°C 放置一周: 0.01 M HCl, 0.1 M NaOH 12 h: 1 M NaOH, 70% 乙酸30 min: 30% 2-异丙醇1 h: 2% SDS pH稳定性:3-12 Store:2-8°C
Ni-NTA SefinoseTM Resin Kit        
Components1) 10 X 1ml 重力柱 (2) Binding Buffer(500ml)(3) Elution Buffer(500ml)
编号        包装        价格        产地
BSP033-2        1kit        1100        BBI
Binding/ Wash Buffer(p H8.0) for Ni-NTA or Ni-IDA SefinoseTM Resin       
编号        包装        价格        产地
BSP030-3        500ml        100        BBI
Elution Buffer(p H8.0) for Ni-NTA or Ni-IDA SefinoseTM Resin       
编号        包装        价格        产地
BSP030-4        500ml        100        BBI
Ni-NTA SefinoseTM Resin (Settled Resin)       
编号        包装        价格        产地
BSP033        10ml        750        BBI
Ni-NTA SefinoseTM Resin (Settled Resin)       
编号        包装        价格        产地
BSP032-1        25ml        1780        BBI
Ni-NTA SefinoseTM Resin (Settled Resin)       
编号        包装        价格        产地
BSP032-2        100ml        7000        BBI
1ml(预装重力柱)       
编号        包装        价格        产地
BSP079-1        5个        500        BBI
1ml(预装重力柱)       
编号        包装        价格        产地
BSP079-2        10个        980        BBI
5ml(预装重力柱)       
编号        包装        价格        产地
BSP079-3        5个        2300        BBI
5ml(预装重力柱)       
编号        包装        价格        产地
BSP079-4        10个        4500        BBI
4楼2010-11-18 21:48:55
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jting0912

新虫 (初入文坛)


我想问一下蛋白纯化,His-tag在目的基因的后面,属于C末端吧~~~用哪种试剂盒呀?novagen联系电话多少?谢谢啦
5楼2012-04-09 21:00:48
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