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wangy0908

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 2 (幼儿园)
金币: 250.3
帖子: 350
在线: 92.9小时
虫号: 1131990

[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接，自连接的DNA用量是10ng，50ul体系。取2ul做第一次pcr，第一次PCR产物稀释200倍，取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点！！

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1楼 2010-11-11 03:16:59

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bigboy123

铜虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-11-14 08:40:30

大概看了一下，你是第一次PCR没有出来吧，一般再扩二次PCR是没有意义的，不用去做，除非是巢式PCR。
应该探讨你第一次为什么没有扩增出来。你需要对你每一步操作进行确认，包括模板是否可靠。

赞一下(2人)

16楼2010-11-13 10:12:34

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查看全部 19 个回答

randomqd

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 246
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虫号: 350527

有可能是loading

wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:57:37

看一下上样buf有没有问题。。。

2楼2010-11-11 08:31:35

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magy2006

木虫 (著名写手)

应助: 4 (幼儿园)
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帖子: 1333
在线: 130.6小时
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wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:43:40

模板浓度极高外加循环数极多

3楼2010-11-11 08:37:36

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aaron2012

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 576.4
帖子: 43
在线: 23.7小时
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下次建议时间跑长点你看Marker都没有完全分开

4楼2010-11-11 09:33:23

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