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wangy0908

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接,自连接的DNA用量是10ng,50ul体系。取2ul做第一次pcr, 第一次PCR产物稀释200倍,取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点!!
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wangy0908(金币+2): 2010-11-12 22:05:24
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-11-11 19:53:30:

就是,找侧翼序列。因为基因发生了突变,不知道侧翼序列是插入还是丢失了。直接扩增也扩不出来。整个基因组的序列是知道的。以及现在突变的大致范围已经确定,所以想通过inverser pcr来确定精确的突变起始点。

如果是这样的话,楼主不妨换下刘老师的TAIL PCR技术,如果是用的拟南芥T-DNA插入的话,Salk institute有现成的引物可参考一下!
13楼2010-11-12 13:01:06
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randomqd

木虫 (小有名气)


有可能是loading

wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:57:37
看一下上样buf有没有问题。。。
2楼2010-11-11 08:31:35
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magy2006

木虫 (著名写手)


wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:43:40
模板浓度极高外加循环数极多
3楼2010-11-11 08:37:36
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aaron2012

银虫 (初入文坛)


下次建议时间跑长点  你看Marker都没有完全分开
4楼2010-11-11 09:33:23
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