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wangy0908

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接，自连接的DNA用量是10ng，50ul体系。取2ul做第一次pcr，第一次PCR产物稀释200倍，取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点！！

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1楼 2010-11-11 03:16:59

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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

wangy0908(金币+2): 2010-11-12 22:05:24

引用回帖:

Originally posted by wangy0908 at 2010-11-11 19:53:30:

就是，找侧翼序列。因为基因发生了突变，不知道侧翼序列是插入还是丢失了。直接扩增也扩不出来。整个基因组的序列是知道的。以及现在突变的大致范围已经确定，所以想通过inverser pcr来确定精确的突变起始点。

如果是这样的话，楼主不妨换下刘老师的TAIL PCR技术，如果是用的拟南芥T-DNA插入的话，Salk institute有现成的引物可参考一下！