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wangy0908

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接，自连接的DNA用量是10ng，50ul体系。取2ul做第一次pcr，第一次PCR产物稀释200倍，取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点！！

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1楼 2010-11-11 03:16:59

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bigboy123

铜虫 (小有名气)

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★
wangy0908(金币+2): 2010-11-12 22:05:09
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-14 08:40:18

两次PCR不要用相同的引物，否则一般经常会弥散的。
最后一步把延伸时间延长点。

赞一下(1人)

12楼2010-11-12 10:03:20

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randomqd

木虫 (小有名气)

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有可能是loading

wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:57:37

看一下上样buf有没有问题。。。

2楼2010-11-11 08:31:35

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magy2006

木虫 (著名写手)

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wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:43:40

模板浓度极高外加循环数极多

3楼2010-11-11 08:37:36

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aaron2012

银虫 (初入文坛)

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下次建议时间跑长点你看Marker都没有完全分开

4楼2010-11-11 09:33:23

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