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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】新引物PCR就是没结果，正负对照都正常，请问可能是什么原因呢？
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Violet2118

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】新引物PCR就是没结果，正负对照都正常，请问可能是什么原因呢？

最近刚定的引物，温度有的略高58度。片段略大，3.2和3.5kb。但是已经做了梯度PCR，延伸温度50，55到65都试过了，电泳什么也没有。但正对照是有条带的，负对照也很干净。正在检查是不是引物问题，我想问问还有别的什么可能？如果是引物问题可能是什么原因？引物序列已经比对了，应该没问题的啊。奇怪了。。。
这个实验刚开始做，就遇到这种问题，很郁闷啊。。。麻烦大家集思广益帮帮忙！谢谢！
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1楼 2010-11-04 22:53:04
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jackiechubut

木虫 (小有名气)
你是用什么作为模板的？要是cDNA的话可以试试用long chain PCR试试
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一笑寂寥空万古，三分明月照大江
4楼2010-11-08 10:37:06
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475502411

铜虫 (著名写手)
是不是模板的问题啊，时间太长可能降解，可以试试提下新模板，应该不是引物或程序的问题，因为你的阳性有结果啊
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2010-11-05 21:52:57
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
刚开始一般都是样本的问题，样本中核酸低或者干脆就没有靶基因。引物只要差不多点，好歹都会给点带的。
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供应PCR增量剂
3楼2010-11-07 09:32:57
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