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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】色谱柱问题
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布丁3835

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】色谱柱问题 已有1人参与

本人现做一个化药分析，才用了2个星期的安捷伦色谱柱，型号ZORBAX Eclipse XDB4.6*150，粒径5um的柱子，现在主峰出现后延肩峰，而且峰变宽了，分离效果明显下降。每次用完之后都会用10%的甲醇以1.0的流速先冲一个小时，接着过度到100%的甲醇，由于样品是溶于甲醇的，完了之后用纯甲醇保存柱子。请教各位大侠怎么样恢复柱效，改善峰形，毕竟这是一根新柱子，不能就这么夭折了吧，谢谢。
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1楼 2010-10-28 13:05:54
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
★
布丁3835(金币+3):谢谢参与
冲柱方法没有问题，不应该是冲柱子的问题，还有两个楼主没说清楚，1。样品干不干净，2。实验时柱压是多少，现在柱压多少，从买来到现在柱压变化
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
2楼2010-10-28 13:19:40
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 13:19:40:
冲柱方法没有问题，不应该是冲柱子的问题，还有两个楼主没说清楚，1。样品干不干净，2。实验时柱压是多少，现在柱压多少，从买来到现在柱压变化

实验时柱压约150bar，从使用到变化之前柱压都没什么变化；样品是实验室合成的，说不清干不干净；流动相里头有缓冲盐，走梯度。
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3楼2010-10-28 13:59:41
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lfycdymax

铁杆木虫 (著名写手)

尚
★
布丁3835(金币+3):谢谢参与
也的样品本身对柱子就是一个伤害……
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突然好想你……
4楼2010-10-28 14:01:09
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
★
布丁3835(金币+3):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 布丁3835 at 2010-10-28 13:59:41:

实验时柱压约150bar，从使用到变化之前柱压都没什么变化；样品是实验室合成的，说不清干不干净；流动相里头有缓冲盐，走梯度。

150pa算比较高了，能把具体流动相说一下吗，特别是缓冲盐和最后一个梯度
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-10-28 14:03:17
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lfycdymax at 2010-10-28 14:01:09:
也的样品本身对柱子就是一个伤害……

就算有伤害也不会那么快吧，才用了2个星期呢
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6楼2010-10-28 14:03:45
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 14:03:17:

150pa算比较高了，能把具体流动相说一下吗，特别是缓冲盐和最后一个梯度

流动相A：约0.65g磷酸铵和2g四丁基氢氧化氨溶于500ml水，用磷酸调ph为7.5左右。
流动相B是纯甲醇。
最后一个梯度是25分钟90%的B过渡到26分钟时60%的B，梯度应该没什么问题，根据药典上做的调整
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7楼2010-10-28 14:08:05
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
引用回帖:
Originally posted by 布丁3835 at 2010-10-28 14:08:05:

流动相A：约0.65g磷酸铵和2g四丁基氢氧化氨溶于500ml水，用磷酸调ph为7.5左右。
流动相B是纯甲醇。
最后一个梯度是25分钟90%的B过渡到26分钟时60%的B，梯度应该没什么问题，根据药典上做的调整

明白了，问题可能在这里，磷酸是柱子头号杀手，磷酸堵柱子那是相当厉害，90%的甲醇你能保证磷酸盐在这么高的浓度下不析出吗，如果析出了就是极其细小的结晶颗粒，密密麻麻的分布，这些细小颗粒很难再次溶解，药典方法不能随便改只能平时注意了，给几个建议1。做实验跑上流动相后不要轻易停泵或降低流速，防止磷酸析出2。每天第一次做实验时用10%甲醇水冲一下柱子，防止新流动相进入柱子时柱子里还是甲醇，这样会析出3。冲柱子甲醇水的时间延长，一个半小时左右。纯个人经验仅供参考，有不足或错误之处见谅
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
8楼2010-10-28 14:13:54
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布丁3835

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-10-28 14:13:54:

明白了，问题可能在这里，磷酸是柱子头号杀手，磷酸堵柱子那是相当厉害，90%的甲醇你能保证磷酸盐在这么高的浓度下不析出吗，如果析出了就是极其细小的结晶颗粒，密密麻麻的分布，这些细小颗粒很难再次溶解，药 ...

谢谢你的建议，现在问题发生了，我该怎么样恢复柱效呢
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9楼2010-10-28 14:25:05
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qwerasdf2783

金虫 (著名写手)
★
布丁3835(金币+3):谢谢参与
1。中药对柱子损伤很大，100多针就可以了，你算算进了多少针。
2。如果是磷酸盐析出，用完后用10%MeOH+90%纯水冲（非缓冲液），再用MeOH冲。
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10楼2010-10-28 14:26:48
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